在分析基質(zhì)復(fù)雜的樣品時(shí)，萃取過程中干擾物質(zhì)容易同目標(biāo)化合物一起萃取出來，這些共萃取物干擾分析。通常需采用額外的凈化步驟來對(duì)萃取液進(jìn)行處理，如柱層析法、固相萃取法（SPE）、凝膠色譜法（GPC）等，以減少共萃取物的干擾。復(fù)方中藥黃連上清丸基體組成復(fù)雜，主要組成藥物17種，《中國(guó)藥典（2010版）》對(duì)黃連上清丸中的小檗堿提取采用水浴，超聲提取，濃縮提取液后過層析柱去除雜質(zhì)，該方法操作復(fù)雜，耗時(shí)耗力。本方法采用In-cell cleanup ASE提取技術(shù)對(duì)復(fù)方中藥黃連上清丸進(jìn)行提取凈化，取得了滿意的效果。
儀器：ASE 350, 表5-13 ASE萃取條件ASE條件 參數(shù)溶劑 甲醇溫度 140℃加熱時(shí)間 7 min靜態(tài)萃取時(shí)間 5 min循環(huán)次數(shù) 2吹掃體積 60%吹掃時(shí)間 90 s總體積 40 mL總時(shí)間 20 min前處理方法：取黃連上清丸水丸1 g，精密稱定，加入硅藻土（DE）適量，研磨，混合均勻。在萃取池（22 mL）中墊入纖維素膜，加入5 g堿性氧化鋁，填平；將混合均勻的樣品加入萃取池中，加速溶劑萃取條件參見表5-13，萃取液定容，濾過，待HPLC分析。
HPLC條件 儀器： Ultimate 3000 HPLC 分析柱：Acclaim 120 C18，5 µm，4.6×250 mm ， P/N：059149；流動(dòng)相：乙腈-33 mmol/L磷酸二氫鉀溶液（35:65）柱溫：30℃檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm進(jìn)樣量：10 µL
結(jié)果與討論In-cell cleanup凈化過程參考2010版藥典，采用堿性氧化鋁作為在線凈化吸附劑。取1 g黃連上清丸樣品，分別于萃取池底部添加不同量的堿性氧化鋁，考察堿性氧化鋁的量對(duì)凈化效果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)不添加堿性氧化鋁萃取時(shí)，HPLC分析小檗堿時(shí)，小檗堿色譜峰被雜質(zhì)峰覆蓋，干擾嚴(yán)重（見圖5-7、圖5-8）。當(dāng)堿性氧化鋁添加量達(dá)到5 g時(shí)，樣品中小檗堿色譜峰未見干擾，采用DAD檢測(cè)器進(jìn)行紫外光譜圖掃描，±50%和100%處三張光譜圖重疊良好，光譜純度因子PPI大于999.0，小檗堿色譜峰沒有雜質(zhì)干擾。比較未凈化樣品和凈化樣品色譜圖，凈化樣品雜質(zhì)峰明顯減少（見圖5-9，紅線圈出部分）
ASE和藥典方法比較分別采用ASE在線凈化技術(shù)和《中國(guó)藥典（2010版）》方法對(duì)同一樣品進(jìn)行萃取，經(jīng)HPLC分析得出結(jié)果（表5-14）。采用ASE在線凈化萃取技術(shù)提取的樣品中小檗堿含量為0.497 mg/g，標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%（n=3）；采用《中國(guó)藥典（2010版）》方法提取的樣品中小檗堿含量為0.474 mg/g，標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5%（n=3）。采用在線凈化-ASE萃取法和《中國(guó)藥典（2010版）》方法對(duì)小檗堿的萃取率接近，但在線凈化-ASE萃取法省去了藥典方法中過層析柱，濃縮等步驟，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)過程，實(shí)現(xiàn)了萃取凈化一步到位的目的
結(jié)果討論采用In-cell cleanup ASE提取中藥復(fù)方黃連上清丸中的小檗堿，和《中國(guó)藥典（2010版）》推薦方法對(duì)小檗堿的萃取率接近，能夠去除干擾小檗堿測(cè)定的雜質(zhì)，能夠達(dá)到萃取凈化一步到位，同時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、快速、高效等特點(diǎn)
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