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氨基酸分析儀檢測(cè)透明膠質(zhì)類(lèi)中的游離氨基酸
摘要
本品為T(mén)au、Glu、Gly、Val、Cysteine等5種氨基酸配制而成的透明膠質(zhì)類(lèi)物質(zhì)，使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸分析儀，對(duì)其所含的游離氨基酸組分及含量進(jìn)行分析，并了解對(duì)該樣品高溫滅菌前后，所含氨基酸的具體影響。結(jié)果表明該未知樣中氨基酸各單個(gè)氨基酸含量的濃度，及高溫滅菌前后的分別見(jiàn)附頁(yè)結(jié)果表。
大昌華嘉是一家專(zhuān)注于亞洲地區(qū)，在市場(chǎng)拓展服務(wù)領(lǐng)域處于領(lǐng)先地位的集團(tuán)。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費(fèi)品、醫(yī)藥保健、特色原料、科技事業(yè)領(lǐng)域的業(yè)務(wù)。大昌華嘉的服務(wù)范圍包括采購(gòu)、市場(chǎng)研究與分析、市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)與銷(xiāo)售、配送與物流以及售后服務(wù)。公司在瑞士證券交易所上市，在全球35個(gè)市場(chǎng)營(yíng)運(yùn)，擁有33,000名專(zhuān)業(yè)員工， 2018年銷(xiāo)售凈額為113億瑞士法郎。大昌華嘉于1865年成立，憑借深厚的瑞士傳統(tǒng)背景，公司在亞洲開(kāi)展業(yè)務(wù)歷史悠久， 深深植根于亞太地區(qū)的社會(huì)和企業(yè)界。大昌華嘉科技事業(yè)部專(zhuān)注于為特定的行業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域提供全面的解決方案。2018年該業(yè)務(wù)單元擁有1,220名員工，凈銷(xiāo)售額為4.121億瑞士法郎。
大昌華嘉(大昌洋行（上海）有限公司)是一家專(zhuān)注于亞洲地區(qū)，在市場(chǎng)拓展服務(wù)領(lǐng)域處于領(lǐng)先地位的集團(tuán)。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費(fèi)品、醫(yī)藥保健、特色原料、科技事業(yè)領(lǐng)域的業(yè)務(wù)。大昌華嘉于1865年成立，憑借深厚的瑞士傳統(tǒng)背景，公司在亞洲開(kāi)展業(yè)務(wù)歷史悠久，深深植根于亞太地區(qū)的社會(huì)和企業(yè)界。
大昌華嘉儀器部專(zhuān)業(yè)提供分析儀器及設(shè)備，代理眾多歐美先進(jìn)儀器，產(chǎn)品范圍包括：顆粒，物理，化學(xué)，生化，通用實(shí)驗(yàn)室的各類(lèi)分析儀器以及流程儀表設(shè)備，在中國(guó)的石化，化工，制藥，食品，飲料，農(nóng)業(yè)科技等諸多領(lǐng)域擁有大量用戶(hù)，具有良好的市場(chǎng)聲譽(yù)。我們的業(yè)務(wù)逐年增加，市場(chǎng)不斷擴(kuò)大。大昌華嘉公司在中國(guó)設(shè)有多個(gè)銷(xiāo)售，服務(wù)網(wǎng)點(diǎn)，旨在為客戶(hù)提供全方位的產(chǎn)品和服務(wù)。
一、樣品前處理
1、所用試劑
1.1 Loading Buffer：鋰鹽系統(tǒng)，pH 2.2
1.2 磺基水楊酸溶液：取50g磺基水楊酸溶于1L純水中
1.3 乙二胺四乙酸二鈉溶液：取10g EDTA-Na溶于1L純水中
1.4 0.06mol/L 鹽酸：取50mL 鹽酸加水稀釋至10mL,混勻
1.5 5種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品、Cystine單標(biāo)
2、前處理設(shè)備
1) 分析天平:精度為 0.0001g
2) 移液槍及槍頭
3) 0.22um濾膜
4) 一次性注射器
5) 低范圍pH試紙
3、樣品制備（參考NY/T 1975-2010）
因樣品為透明膠質(zhì)類(lèi)物質(zhì)，且可能含有未知大分子等雜質(zhì)，故需(參考NY/T 1975)進(jìn)行除蛋白前處理：
吸取2 mL樣品于10 mL離心管或試管中,準(zhǔn)確加人2 mL磺基水楊酸溶液(1.2)，混勻,放置1h。準(zhǔn)確加入1 mL EDTA-Na溶液(1.3)和1 mL鹽酸溶液(1.4),混勻,離心15 min(或用0.45um的微孔濾膜過(guò)濾)。吸取上清液(或?yàn)V液)1 mL(測(cè)定當(dāng)前pH，若有需要?jiǎng)t可加少許的Loading Buffer (1.1),使氨基酸濃度處于儀器檢測(cè)范圍內(nèi))，移液槍取上述溶液1mL至一次性注射劑，過(guò)濾膜，上機(jī)待測(cè)。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：
1) 色譜柱：Biochrom Li型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，4.6*20cm
2) 分離程序：
3) 運(yùn)行時(shí)間：經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 168.15min
4) 反應(yīng)單元溫度：135°C。
5) 檢測(cè)波長(zhǎng)：570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。
三、樣品中氨基酸含量的計(jì)算
樣品測(cè)定液氨基酸的含量按式(1)計(jì)算:
Ci = Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:
Ci ———樣品測(cè)定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Cs ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Ai ———試樣測(cè)定液氨基酸i的峰面積;
As ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;
F ———樣品稀釋倍數(shù)。
附：透明膠質(zhì)類(lèi)物質(zhì)中，高溫滅菌前后比較的游離氨基酸，分析圖譜及做樣結(jié)果：
由結(jié)果可知：高溫滅菌之后的游離氨基酸含量，相較于滅菌前會(huì)有少許提升。這是由于滅菌前的樣品中可能含有的少許干擾物質(zhì)或雜菌，存在經(jīng)過(guò)高溫滅菌等的處理會(huì)被破壞，釋放少許的氨基酸的可能，屬合理正?，F(xiàn)象。
圖1. 樣品A--滅菌前—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
圖2. 樣品B--滅菌后—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
