細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。
凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍,標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min。我們常用的傳統(tǒng)方法是將凍存管置于4℃30分鐘--->-20℃60分鐘--->-80℃過夜--->液氮罐。但是由于步驟較多,時(shí)間間隔較長(zhǎng),很容易遺忘。但是任何一個(gè)步驟的拖延都會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞存活。而市面上程序冷凍儀又價(jià)格昂貴,必要性也不高,不是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都擁有的。
方法改進(jìn):我們考慮到泡沫塑料有很好的保溫隔熱效果,同時(shí)又注意到我們購(gòu)買的BD公司的15ml離心管包裝里的泡沫塑料孔徑與凍存管相當(dāng)。我們改進(jìn)的凍存方法是:可將細(xì)胞凍存管放入泡沫支架中,再加蓋一塊同樣的泡沫支架后,直接放入-80℃冰箱過夜后轉(zhuǎn)移進(jìn)液氮罐。該方法不但利用了廢物利于環(huán)保,而且省時(shí)省心,非常便捷有效。