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            上海乾思生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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            Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

            時(shí)間:2015/5/15閱讀:887
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            關(guān)鍵詞:Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
            簡(jiǎn)介:世界*品牌Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
            Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
            我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面,我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
            產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
            測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
            1材料準(zhǔn)備:
            可拍照顯微鏡,Transwell小室,孔徑8μm,沒(méi)包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用),Transwell遷移實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板24孔板。細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買(mǎi)的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,無(wú)血清DMEM,(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基,DMEM*培養(yǎng)基,1640*培養(yǎng)基(也可加到20%血清),無(wú)菌PBS,棉簽,胰酶(0.25?TA胰酶),4%多聚甲醛固定液或者甲醇,結(jié)晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS結(jié)晶紫)
            2步驟和流程
            2.1基質(zhì)膠鋪板:
            用BD公司的Matrigel 1:8(根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生mmp的量來(lái)決定)稀釋,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠。使用前進(jìn)行基底膜水化。
            2.2制備細(xì)胞懸液
            ①制備細(xì)胞懸液前可先讓細(xì)胞撤血清饑餓12-24h,進(jìn)一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。
            ②消化細(xì)胞,終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的無(wú)血清(或者1?S)培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細(xì)胞密度至5×105/ml。
            2.3接種細(xì)胞
            ①取細(xì)胞懸液100μl加入Transwell小室。
            ② 24孔板下室一般加入600μl含20?S的培養(yǎng)基,特別注意的是,下層培養(yǎng)液和小室間常會(huì)有氣泡產(chǎn)生,一旦產(chǎn)生氣泡,下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了,在種板的時(shí)候要特別留心,一旦出現(xiàn)氣泡,要將小室提起,去除氣泡,再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板。
            ③培養(yǎng)細(xì)胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定)。24h較常見(jiàn),時(shí)間點(diǎn)的選擇除了要考慮到細(xì)胞細(xì)胞侵襲力外,處理因素對(duì)細(xì)胞數(shù)目的影響也不可忽視。
            2.4結(jié)果統(tǒng)計(jì)
            直接計(jì)數(shù)法,“貼壁"細(xì)胞計(jì)數(shù),這里所謂的“貼壁"是指細(xì)胞穿過(guò)膜后,可以附著在膜的下室側(cè)而不會(huì)掉到下室里面去,通過(guò)給細(xì)胞染色,可在鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞。
            取出Transwell小室,棄去孔中培養(yǎng)液,用無(wú)鈣的PBS洗2遍,甲醇固定30分鐘,將小室適當(dāng)風(fēng)干。
            0.1%結(jié)晶紫染色20 min,用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞,用PBS洗3遍。
            400倍顯微鏡下隨即五個(gè)視野觀察細(xì)胞,記數(shù)。

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