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            上海乾思生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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            基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建

            時(shí)間:2015/7/1閱讀:553
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            關(guān)鍵詞:基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
            簡(jiǎn)介:世界*品牌基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
            基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
            我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
            產(chǎn)品品牌:基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
            測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
            基因組DNA文庫包括了基因組所有順序的隨機(jī)克隆片段。一個(gè)好的基因組DNA文庫的大小應(yīng)足夠大,以便包括所有的基因DNA順序。DNA克隆片段也應(yīng)足夠大,其中包括整個(gè)基因、連接基因及它們穩(wěn)定形式所要的側(cè)翼順序。為了獲得高的克隆效率和較大的插入片段,λ噬菌體載體和質(zhì)粒經(jīng)常被使用構(gòu)建基因組DNA文庫。λ噬菌體文庫易于操作,噬菌體載體上有多克隆位點(diǎn)。λ噬菌體能容納10-50kb插入DNA,載體類型應(yīng)根據(jù)所要基因組DNA片的大小和用途來選擇。
            構(gòu)建一個(gè)基因組DNA文庫的基本步驟:
            ①分離純化基因組DNA;
            ②切割DNA成合適大小的片段以用于克??;
            ③載體DNA的制備;
            ④把基因組DNA片段和載DNA連接;
            ⑤包裝重組分子;
            ⑥測(cè)定入噬菌體滴度;
            ⑦擴(kuò)增DNA文庫;
            ⑧評(píng)估文的質(zhì)量。
            基因組文庫構(gòu)建步驟:1、載體: 
            l噬菌體:48.5kb,插入型(zui多可容納9kb)、取代型(可容納 38-51kb,zui適19-20kb), EMBL, Charon 粘性質(zhì)粒(Cosmid):4-6kb, 質(zhì)粒+噬菌體的性質(zhì),可容納大片段的外源基因,zui多可容納46kb。 酵母人工染色體克隆體系(YAC,Yeast Artificial Chromosome  Cloning System) 插入大小200—1000kb 2、 載體DNA的制備: 高分子量的外源DNA 100-150kb載體DNA酶切反應(yīng)-----載體臂的純化-----載體脫磷處理 www.cqwestern。。com(常用BamHI)   (蔗糖密度梯度離心)  (堿性磷酸酶) 3、連接和包裝:外源片段與兩臂之間的比例,包裝蛋白 4、感染宿主菌:選擇合適的宿主菌,LE392, NM538, NM539, KW251等 5、基因組文庫的保存和擴(kuò)增: 6、測(cè)滴度,要在106fu以上
            7、保存:氯仿4℃,7% DMSO -70℃

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