裸鼠皮下成瘤實驗技巧

1、細胞狀態(tài)是成瘤實驗的關(guān)鍵，所以細胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜;收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細胞中的血清。
3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支，接種體積為0.1ml，因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml。
4、細胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內(nèi)完成，途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團而降低細胞成活率。
7、接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，減少注射后細胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。