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背景簡(jiǎn)介：iTRAQ和TMT的技術(shù)原理一樣，所不同的是二者的分子結(jié)構(gòu)有差異。與SILAC相比（標(biāo)記蛋白質(zhì)），iTRAQ和TMT是對(duì)肽段進(jìn)行標(biāo)記的。依據(jù)iTRAQ/TMT標(biāo)簽的質(zhì)量數(shù)差異，通過(guò)MS實(shí)現(xiàn)對(duì)多組樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量：

SILAC是通過(guò)MS( MSl)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量，而iTRAQ/TMT是通過(guò)二級(jí)MS( MS/MS．MS2)進(jìn)行定量的；

iTRAQ/TMT兼容性好，并且能同時(shí)分析多達(dá)8-10組的樣品，分析通量高。

試驗(yàn)流程

1、分別提取蛋白質(zhì)并定量；

2、Trypsin分別對(duì)蛋白進(jìn)行酶解，提取肽段；

3、用不同質(zhì)量數(shù)的iTRAQ/TMT標(biāo)簽分別對(duì)肽段樣品進(jìn)行標(biāo)記：

4、標(biāo)記完成后，混合樣品，用SCX進(jìn)行組分分離（15-20組分）；

5、對(duì)每個(gè)組分進(jìn)行LC-MS分析：

6、蛋白質(zhì)鑒定與定量分析，篩選差異表達(dá)的蛋白；

7、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（Western blot，EUSA等）。