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2D-DIGE實驗

DIGE：雙向熒光差異凝膠電泳，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)，其分離蛋白質(zhì)混合的原理與雙向電泳是一致的，主要利用蛋白質(zhì)的等電點和分子量的差異來分離蛋白質(zhì)混合物，同時應(yīng)用熒光染料的靈敏度及內(nèi)標的使用等技術(shù)，使其在定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)雙向電泳。
 DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5，它們能與蛋白質(zhì)的賴氨酸側(cè)鏈氨基反應(yīng)而使蛋白質(zhì)被標記，被標記蛋白質(zhì)的等電點和分子量不受影響，等量混合標記好的蛋白質(zhì)后進行雙向電泳，不同凝膠之間可以通過cy2內(nèi)標匹配，消除凝膠之間的差異，蛋白質(zhì)表達量的變化則通過cy3和cy5不同熒光的強度來體現(xiàn)。

2D-DIGE實驗與常規(guī)雙向電泳后，銀染或考染膠相比，DIGE具有以下優(yōu)勢：
 1、靈敏度高，低可檢測到125pg的蛋白質(zhì)；
 2、高效性，同一塊凝膠上可以電泳兩個樣品，減輕了工作量；
 3、線性范圍更廣,動態(tài)范圍高達10-5；
 4、定量, 采用內(nèi)標消除了凝膠與凝膠之間的實驗誤差，顯著提高了實驗的度和可重復(fù)性；
 5、統(tǒng)計學(xué)分析，ImageMaster7.0（DIGE）軟件可以得到統(tǒng)計學(xué)可信的結(jié)果，降低了操作者之間的偏差。