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SILAC實驗

背景簡介：SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術(shù)是依據(jù)細胞生長對必需氨基酸的依賴原理，利用穩(wěn)定同位素標記( 13C，15N，2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質(zhì)組進行代謝標記的方法；13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素，沒有放射性，因此可以在常規(guī)條件下進行試驗。

Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C，15N，2H)等穩(wěn)定同位素標記的R、K、L加入細胞培養(yǎng)基中，在細胞進行蛋白質(zhì)合成時，這些穩(wěn)定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質(zhì)中。通過>6代的細胞增殖，整個細胞的蛋白質(zhì)組會被穩(wěn)定同位素氨基酸”標記

SILAC“標記”了蛋白質(zhì)與“未標記”的蛋白質(zhì)（普通培養(yǎng)基培養(yǎng)）存在數(shù)目的質(zhì)量差異，該質(zhì)量差異在后續(xù)LC-MS的質(zhì)譜( MSl)中呈現(xiàn)一對同位素質(zhì)譜峰，通過質(zhì)譜峰的信號強度能實現(xiàn)對2組樣品中每一個蛋白質(zhì)表達水平的相對定量，終能確定蛋白質(zhì)表達水平差異（差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析）和區(qū)分特異性和非特異性相互作用（蛋白質(zhì)相互作用分析）；同時通過二級質(zhì)譜( MS/MS，MS2)實現(xiàn)對樣品中蛋白質(zhì)的鑒定。

SILAC實驗技術(shù)結(jié)合LC-MS能同時實現(xiàn)對2組樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。實驗技術(shù)“高、大、上”，定量，通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質(zhì)表達水平差異，便于快速找到感興趣的目標分子。同時，利用SILAC技術(shù)，能明顯提高文章的檔次。