狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

1、材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料
雌性Wistar大鼠。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
本實(shí)驗(yàn)選用雌性Wistar大鼠40只，體重260~300 g，隨機(jī)分成2組。正常對(duì)照組：20只。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M：20只。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 POF大鼠模型制備 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片)，0.6 mg/(100 g•d)體重，灌胃1次/d，連續(xù)9d，建立POF動(dòng)物模型。
1.3.2 組化標(biāo)本制備
對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔麻醉后開胸，經(jīng)左心室70滴/min滴入1％肝素鈉的生理鹽水500ml，同時(shí)剪開右心耳。繼用0.1m磷酸鹽緩沖液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的卵巢組織，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中進(jìn)行后固定大約2h，之后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的卵巢組織切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放，至組織薄片沉底，經(jīng)水包埋，恒冷箱連續(xù)橫切片，片厚20μm。經(jīng)OCT包埋，恒冷箱連續(xù)切片，片厚16 μm，-70℃保存?zhèn)溆谩?br />1.3.3 尼氏染色
冷凍切片吹干，經(jīng)PBS漂洗5min3次，將切片置入1%甲苯胺藍(lán)溶液中37℃孵育90min，取出后用蒸餾水沖洗，PBS漂洗5min3次，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光濕微鏡下觀察。
 

2、結(jié)果

尼氏染色結(jié)果:
正常對(duì)照組大鼠卵巢的尼氏染色切片上，卵泡數(shù)目正常，卵泡無閉鎖，間質(zhì)無明顯增生。
實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠卵巢可見卵巢萎縮，卵泡數(shù)目減少，卵泡閉鎖增多，間質(zhì)增生明顯。
根據(jù)尼氏染色結(jié)果證明POF動(dòng)物模型制備成功。