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常用動(dòng)物 大鼠,小鼠,性成熟,8-10周齡
適應(yīng)性飼養(yǎng)后,用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入小鼠陰道內(nèi),并在陰道內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)幾下后取出,涂于載玻片上,用95%酒精固定30min后晾干。涂片進(jìn)行HE染色或瑞士染色,觀察動(dòng)情周期。連續(xù)觀察2周,每日定時(shí)進(jìn)行陰道涂片檢查,觀察動(dòng)情周期。選擇連續(xù)有2個(gè)或2個(gè)以上正常動(dòng)情周期(陰道涂片為大量無(wú)核角化細(xì)胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,大鼠),使動(dòng)物統(tǒng)一處于動(dòng)情期。
捐贈(zèng)鼠和接受鼠比例為1:2。
建模方法I
大鼠:腹腔注射麻醉后,將大鼠固定于***上,腹部剪毛,消毒,并在無(wú)菌條件下開(kāi)腹。在尿道口上約1cm處做垂直正中縱切口長(zhǎng)約2-3cm進(jìn)腹。大鼠子宮呈Y型,分離左側(cè)子宮,近端離左子宮角1cm處結(jié)扎,遠(yuǎn)端離卵巢2cm處結(jié)扎,并結(jié)扎兩端間的子宮系膜血管,切除長(zhǎng)約1.5-2.0cm的子宮段,立即放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中,修剪去子宮漿膜外的脂肪組織,縱向切開(kāi)子宮腔,剝?nèi){膜層及肌層,將子宮內(nèi)膜片剪成5mm×5mm大小,移植到腹壁血管豐富處,注意其內(nèi)膜面與皮下組織貼合。逐層縫合傷口,待老鼠自然蘇醒后常規(guī)飼養(yǎng)。術(shù)后每天注射****,共3天。
建模4周后,開(kāi)腹檢查所有造模大鼠移植的子宮內(nèi)膜是否生長(zhǎng)。若見(jiàn)移植物體積增大,形成表面被覆結(jié)締組織并有血管形成、內(nèi)有液體積聚的透明小囊泡,則證明造模成功。
建模方法II
小鼠:動(dòng)情期C57BL/6小鼠,脫頸椎法處死,仰臥位固定于***,腹部酒精消毒后,鋪上無(wú)菌治療洞巾,戴無(wú)菌手套,在恥骨聯(lián)合上方0.5cm處,沿正中線剖開(kāi)腹腔。找到Y形子宮,小心分別牽出左、右側(cè)子宮,細(xì)心分離雙側(cè)子宮系膜。離斷宮角與卵巢,在Y形子宮分叉分別剪斷左側(cè)及右側(cè)子宮,放入裝有10mL37℃生理鹽水的無(wú)菌彎盤(pán)中,反復(fù)漂洗子宮表面的血跡,進(jìn)一步分離剩余粘附的子宮系膜。將兩個(gè)子宮角分別放置于兩個(gè)無(wú)菌彎盤(pán)中,將它們直接剪成大小約1mm3的大小均等的碎片,并將它們懸浮于37℃生理鹽水中。將捐贈(zèng)鼠的子宮按1:2的比例接種于受鼠腹腔,用0.3mL生理鹽水懸浮彎盤(pán)里的組織碎片。
隨機(jī)取動(dòng)情期C57BL/6小鼠,取臍下0.5cm偏正中線0.5cm處的左下腹為進(jìn)針點(diǎn),將溶有子宮組織碎片的0.3mL生理鹽水用20號(hào)針頭連同子宮組織快碎片注入接受鼠的腹腔,后放置于鼠籠。直至第9天。隨機(jī)取動(dòng)物,處死后,取異位內(nèi)膜,進(jìn)行冰凍切片制備,HE染色觀察異位內(nèi)膜病灶是否有典型的內(nèi)膜腺體及間質(zhì),提示復(fù)制動(dòng)物模型是否成功。
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