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            豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明

            來(lái)源:上海雙贏生物科技有限公司   2016年08月26日 18:55  

            豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明

            l本試劑盒僅供科研使用。

            l本試劑盒用于體外定性檢測(cè)豬血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中豬肺炎支原體(MP)水平。

            l有效期:6個(gè)月

            l保存條件:2-8℃

            實(shí)驗(yàn)原理:

              本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中豬肺炎支原體(MP)。用純化的豬肺炎支原體(MP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中豬肺炎支原體(MP) 相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的豬肺炎支原體(MP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬肺炎支原體(MP)的存在與否。

            豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒組成:

            試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

            說(shuō)明書 1份 1份 R.T.

            封板膜 2片(48) 2片(96) R.T.

            密封袋 1個(gè) 1個(gè) R.T.

            酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

            陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

            陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

            酶標(biāo)試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

            樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

            顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

            顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

            終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

            濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

            豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒樣本處理及要求:

            1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

            2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

            3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

            4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

            5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

            6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

            7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

            豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒操作步驟:

            1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

            2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

            3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

            5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

            6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

            7.溫育:操作同3。

            8.洗滌:操作同5。

            9.顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘

            10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

            結(jié)果判定:

              試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

              臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

              陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為豬肺炎支原體(MP) 陰性

              陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為豬肺炎支原體(MP) 陽(yáng)性

            注意事項(xiàng)

            1.操作嚴(yán)格按照豬肺炎支原體(MP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

            2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

            3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

            4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            5.底物請(qǐng)避光保存。

            6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm

            7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

            保存條件及有效期

            1.試劑盒保存:2-8℃。

            2.有效期:6個(gè)月

            免責(zé)聲明

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