CTLL-2細胞|CTLL-2細胞株 培養(yǎng)說明

一、細胞培養(yǎng)條件

產品名稱：CTLL-2細胞

中文名稱：小鼠T淋巴細胞

生產特性：懸浮生長

培養(yǎng)條件：RPMI1640+100U/ml（重組白介素-2）+10% FBS

傳代方法：1:2

傳代情況：2-3天換液/傳代

凍存條件：90% FBS+10%DMSO

支原體檢測：陰性

產品供應商：上?；鄯f生物科技有限公司

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二、細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

三、細胞培養(yǎng)步驟

1. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)隔夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)液終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

注意：

我細胞庫認為購買細胞的客戶有培養(yǎng)細胞的經驗，客戶收到細胞后，嚴格按照本細胞培養(yǎng)條件更換*培養(yǎng)基。（細胞庫推薦使用的培養(yǎng)基，我?guī)焓褂玫呐囵B(yǎng)基為Gibco,血清SERANA或Gemini，雙抗Gibco，胰酶Gibco）

如果因為客戶缺少基本的細胞培養(yǎng)知識或培養(yǎng)條件而導致細胞各類問題，我?guī)旄挪回撠?。對于因缺少細胞培養(yǎng)知識和時間，建議客戶可我細胞庫代為培養(yǎng)細胞和后續(xù)相關實驗。