關(guān)于間接ELISA試劑盒標(biāo)本通常都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)構(gòu)成差錯(cuò)，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí)，很小的差錯(cuò)，會(huì)致使較大的相對(duì)差錯(cuò)，使陰性（或弱陽性）標(biāo)本呈陽性（或陰性）。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺出，不行發(fā)作氣泡?，F(xiàn)在，大有些血站都已運(yùn)用全自動(dòng)酶免加樣體系處理標(biāo)本，可較好地防止以上差錯(cuò)。
在ELISA中的洗刷是確保得到可重復(fù)成果的關(guān)健一步，應(yīng)致使操作者注重。無論是手工操作仍是機(jī)器操作，得出不的成果常與不的洗刷有關(guān)，ELISA即是靠洗刷來到達(dá)分離游離和的酶符號(hào)物的意圖。經(jīng)過洗刷以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體的物質(zhì)，以及在反響進(jìn)程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質(zhì)。
每種ELISA試劑盒都有其*反響形式，其間溫度和溫育時(shí)間操控是重要要素。因孵育溫度高，反響時(shí)間長，會(huì)構(gòu)成整板本底高，陽性率高。溫育通常用濕盒或水浴，ELISA試劑盒反響板不宜疊放，以確保各板溫度都能敏捷平衡，為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋。
作為記載測定成果的儀器，酶標(biāo)儀的功能安穩(wěn)與否，決議成果的牢靠度。首要酶標(biāo)儀應(yīng)定時(shí)進(jìn)行養(yǎng)護(hù)，對(duì)濾光片要定時(shí)校對(duì)；其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要，*運(yùn)用雙波長，一個(gè)檢查波長，一個(gè)參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度區(qū)別構(gòu)成的光攪擾。此外，在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)*先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀功能有所不同，運(yùn)用中應(yīng)具體閱讀說明書
綜上所述，盡管現(xiàn)在上以及我國有了有些規(guī)范血清或參比血清（血清盤），可是酶聯(lián)免疫吸附技能現(xiàn)在在技能上沒有做到規(guī)范化。受方法學(xué)及技能條件的約束，在酶聯(lián)免疫吸附測定中有時(shí)不行防止的會(huì)呈現(xiàn)必定的非特異性，ELISA試劑盒咱們可以經(jīng)過以上辦法把非特異性顯色降至zui低限底，然后提高檢查的特異性，并得到更、牢靠的試驗(yàn)成果。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）自面世以來，以其敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡潔、安全，創(chuàng)始了免疫學(xué)確診的確診方面得到了廣泛的使用?？墒荅LISA試劑盒在它的研討、出產(chǎn)及運(yùn)用中常常會(huì)碰到非特異性顯色疑問，ELISA試劑盒特異性、查驗(yàn)標(biāo)本中含酶符號(hào)物的攪擾物，操作不當(dāng)?shù)纫囟紩?huì)致使這么的成果。本文就在試驗(yàn)進(jìn)程中發(fā)作的一些原因及怎么采納一些辦法，消除非特異性顯色作以分析。
風(fēng)濕因子（RF）、黃疸等，類風(fēng)濕因子是可作用于多種動(dòng)物以及人IgGFc段的自身抗體，大都為IgM類，能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反響，然后呈現(xiàn)非特異性顯色。
黃疸血標(biāo)本中常富含內(nèi)源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為符號(hào)物，就有也許發(fā)作非特異性顯色。
常因樣品收集、儲(chǔ)存、處理不當(dāng)構(gòu)成如樣品溶血，被細(xì)菌污染，標(biāo)本凝聚不全等。溶血標(biāo)本，紅細(xì)胞溶解決裂，釋放出血紅素構(gòu)成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為符號(hào)的ELISA測定中，溶血標(biāo)本也許會(huì)增加非特異性顯色。如有細(xì)菌污染，菌體中也許富含內(nèi)源性HRP（辣根過氧化酶），有國內(nèi)報(bào)導(dǎo)酶免HBsAg試劑檢查溶血標(biāo)本時(shí)可構(gòu)成假陽性。如在冰箱中保留過久，其間的IgG可發(fā)作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。因而，血標(biāo)本在收集處理時(shí)應(yīng)當(dāng)心，在冰箱中保留不易過久。
ELISA試劑盒標(biāo)本凝聚不全時(shí)，血清中會(huì)殘留有些纖維蛋白原，也易構(gòu)成假陽性。