ELISA試劑盒各環(huán)節(jié)中常見問題及解決方法
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的運用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的查看效果影響較大,如不留心,有或許致使顯色不全、花板等結(jié)果。
將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的要素及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟示,前進試驗質(zhì)量。
下面分析Elisa試驗操作中或許影響結(jié)果的要素,并給出相應(yīng)的解決辦法一、選擇試劑
選擇質(zhì)量的查看試劑,嚴峻按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
或許要素:
1)血清或血漿標本分別欠好即進行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多構(gòu)成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒標本為血清:將血液先天然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:有必要運用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后有必要當即倒置采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)查看,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 假如選用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。
三、 孵育
或許要素:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時間人為延伸,致使非特異性緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明過程嚴峻操控操作時間。
四、洗板
或許要素:
1) 選用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 選用半自動洗板機洗板時,洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多構(gòu)成洗板等待時間長。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(選擇潔凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
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