【組織培養(yǎng)試劑】

一般提示：優(yōu)化您的細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更。

基礎培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基（如，RPMI 1640和DMEM）。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)（氨基酸，葡萄糖），維生素，無機鹽，和緩沖物質(zhì)。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題。務必要使培養(yǎng)基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質(zhì)，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細胞毒性物質(zhì)。

酚紅試劑可保護細胞免受一些HEPES降解所產(chǎn)生的毒性效應，但在使用未加酚紅試劑的培養(yǎng)基的應用場合下，如熒光素酶的測定，細胞毒性則仍然是一個問題。

胎牛血清—血清是一種含有白蛋白、球蛋白、生長促進因子和生長抑制因子的極為復雜的混和物。采集血清所用動物的年齡、營養(yǎng)水平、和健康狀況可影響到血清中這些成分的數(shù)量和質(zhì)量。因此血清易受顯著生物學變異的影響。

添加劑—某些細胞的生長依賴于一些對生命力或細胞分裂*的物質(zhì)（如，生長因子，微量元素，必需代謝物和蛋白等）。

CO₂培養(yǎng)箱—細胞生長所需環(huán)境為37℃、相對濕度為95％的CO₂培養(yǎng)箱。用CO₂是為了控制pH值。細胞生理對pH的變化非常敏感，因此多數(shù)細胞培養(yǎng)基都含有碳酸氫鹽緩沖體系。有些培養(yǎng)基需要CO₂ 濃度為5％來有效控制pH值，而另一些則需要10％的CO₂。需要向您的培養(yǎng)基供應者核對一下適當?shù)腃O₂濃度。如果培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)條件與所需條件不一致（溫度、濕度和CO₂）則會導致實驗結果的板間變異性。來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學物質(zhì)，或真菌／細胞的污染也都可能影響到細胞生理

【細胞】

一般提示：密切觀察您的細胞；確保它們狀態(tài)良好。在開始轉染細胞之前，先制定一個適當?shù)姆N板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持*狀態(tài)。

增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結果的一致性和質(zhì)量的zui重要的變量。為幫助解決這些問題，羅氏應用科學部與ATCC®（美國菌種保藏中心）進行了合作。
為保證將被轉染細胞的質(zhì)量，羅氏應用科學部建議使用新近從ATCC®獲得的細胞系。

分裂細胞相比較非分裂細胞—分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數(shù)轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前一天種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于生長過度的狀態(tài)。由于FuGENE® 6和HD轉染試劑對于細胞作用溫和，可同時進行貼壁細胞的種板和轉染。
此外，還常用促有絲分裂刺激物（如，病毒轉化，生長因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細胞）來活化原代培養(yǎng)細胞。

貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異顯著。天生趨于懸浮的細胞（如HL 60，Jurkat）非常難以轉染。相反，天生為貼壁的細胞（如HEK，CHO）則可適應懸浮生長的條件。

這兩種細胞（即那些天然懸浮的和那些適應懸浮的細胞）的漿膜是不一樣的。據(jù)推測轉染過程中的一個限制步驟就是通過內(nèi)吞作用攝取轉染分子（DNA或RNA與轉染試劑的復合物）；然而，目前對此尚未有分子水平上的合理機制的解釋。細胞間膜結構的差異可能是某些細胞類型天生難以轉染的部分原因。所以，尋找更有效轉染試劑的工作目前還主要是經(jīng)驗性的，尤其對于那些天生為懸浮的細胞而言更是如此。

這常常是在不含血清而含有抑制轉染的特殊添加劑的培養(yǎng)基中發(fā)生。經(jīng)小心處理后，這些細胞可適應于在沒有添加劑的環(huán)境中懸浮生長。如果這些適應于懸浮生長的貼壁細胞在沒有這些添加劑的環(huán)境中生長，那么它們就可以被轉染。

分批方案—在對培養(yǎng)細胞進行分批傳代培養(yǎng)之前，必須把貼壁細胞用胰蛋白酶消化使之脫離培養(yǎng)基質(zhì)。這個常規(guī)操作可導致正常細胞功能受到嚴重損害。因此分批方案的不同（如，胰蛋白酶消化時間的延長，胰蛋白酶的失活，以及消化后直到轉染開始的時間）都可能對轉染實驗有所影響。
如果在轉染時細胞過于密集，那么種到培養(yǎng)板上的就會是細胞團塊而非單個細胞。
對于某些細胞／試劑組合而言，漿膜狀態(tài)被改變后有可能會影響到所用試劑和DNA的*配用量和配比。

傳代次數(shù)—傳代次數(shù)是指對一個細胞系進行分批傳代的頻度（通常在一個實驗室范圍內(nèi)）。在某些情況下，自建立細胞系起的確切傳代次數(shù)無法得知。

某些細胞系相比較其他細胞系而言較不穩(wěn)定，可能會隨著培養(yǎng)時間的延長而改變，視不同的細胞系和培養(yǎng)條件而定。培養(yǎng)條件的不同可引起克隆選擇。因此名稱相同的同一細胞系有關其生理學和形態(tài)學（以及轉染能力）性質(zhì)可能會有很大的差異。