ELISA是以免疫學(xué)反響為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反響與酶對(duì)底物的催化作用相起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技能。免疫酶技能是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上,構(gòu)成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原,稱為酶物。該酶物的酶在免疫反響后,作用于底物使之呈色,依據(jù)色彩的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。
ELISA法是免疫酶技能的一種,其特點(diǎn)是使用聚苯乙烯微量反響板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反響和酶促反響都在其間進(jìn)行。在每次反響后都要重復(fù)洗刷,這既確保了反響的定量關(guān)系,也避免了末反響的游離抗體/抗原的別離進(jìn)程。在ELISA法中。酶促反響只進(jìn)行一次,而抗原、抗體的免疫反響可進(jìn)行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反響。
現(xiàn)在常用的幾種ELISA方法有:測(cè)定抗體的直接法,測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本試驗(yàn)選用直接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要進(jìn)程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反響板的凹孔內(nèi),加待測(cè)抗體,保溫后洗刷以除掉未的雜蛋白質(zhì),加酶標(biāo)抗抗體,保溫后洗刷,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿停止酶促反響,用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。
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