1.什么是RIPA裂解液？
RIPA裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜），從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實(shí)驗(yàn)。

2.RIPA裂解液里有什么？

  RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白間的相互作用等方式裂解組織或細(xì)胞；蛋白酶抑制劑可有效抑制各類蛋白酶的活性，避免蛋白過度降解；磷酸酶抑制劑可有效抑制去磷酸化作用。各組分具體作用見表1。
   值得注意的是，由于RIPA裂解液中含有一些穩(wěn)定性相對(duì)較弱的酶類抑制劑，故應(yīng)放在-20℃保存。其中PMSF的穩(wěn)定性極弱，半衰期只有0.5 h，所以必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
表1.RIPA裂解液里的成分及其作用

3.RIPA裂解液有哪些種類？
目前市面上的裂解液根據(jù)其主要裂解成分等不同大致分為強(qiáng)、中、弱等幾類。表2列舉了翊圣生物提供的四種RIPA裂解液，可滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
表2.翊圣生物的四種RIPA裂解液及其基本特點(diǎn)

4.如何選擇合適的RIPA裂解液？
     如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)，該裂解液在裂解細(xì)胞或組織后一般不會(huì)形成粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊，不必采用超聲處理就可進(jìn)行下一步操作。同時(shí)，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測。
     如果使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)；如果您在做IP實(shí)驗(yàn)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來，這時(shí)候您需使用裂解強(qiáng)度較強(qiáng)的裂解液，比如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)。反之，如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法IP下來，則說明您使用的裂解液強(qiáng)度過強(qiáng)，此時(shí)需使用裂解強(qiáng)度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。

5. RIPA裂解液適用于哪些細(xì)胞？
幾乎適用于所有實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞和各種組織。包括各種懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞及動(dòng)物組織等。

6. 如何判斷細(xì)胞的裂解程度？
細(xì)胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細(xì)胞，沒有細(xì)胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導(dǎo)致的；相反，如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導(dǎo)致的。
組織裂解：先將組織剪成細(xì)小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細(xì)胞破碎率大于90%，同時(shí)組織已經(jīng)*裂解，沒有明顯的小組織塊。之后按照細(xì)胞裂解的步驟進(jìn)行裂解，裂解程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)與細(xì)胞裂解一致。
RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

7. RIPA儲(chǔ)存出現(xiàn)白色沉淀，為什么？
一般是由于裂解液中SDS在儲(chǔ)存的時(shí)候沉淀析出導(dǎo)致，這時(shí)只需將裂解液放置于37℃水浴加熱后恢復(fù)室溫即可使用。

8. RIPA裂解液可以獲得細(xì)胞中的不同蛋白嗎？
RIPA裂解液提取的是全蛋白，包括核蛋白、漿蛋白、膜蛋白等。如果要提取特定的蛋白（如：核蛋白、膜蛋白）則可利用專門提這類蛋白的試劑盒進(jìn)行提取。
 
紙上得來終覺淺，覺知此事要躬行。小翊在這里給出的建議僅供大家參考，具體裂解液的選擇和使用，還需要根據(jù)您自己的實(shí)驗(yàn)需求和實(shí)驗(yàn)效果選擇您實(shí)驗(yàn)的RIPA裂解液。

9.訂購信息

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