細(xì)胞凝集反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)原理

 細(xì)胞質(zhì)膜是由蛋白質(zhì)不同程度鑲嵌在脂雙層中所形成的動態(tài)流動結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)和脂類分子又與寡糖鏈結(jié)合為糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至細(xì)胞表面的分枝狀寡糖鏈在質(zhì)膜表面形成細(xì)胞外被（又稱為糖萼）。許多研究結(jié)果表明：細(xì)胞間的分子識別、細(xì)胞的生長和分化、免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生等均與細(xì)胞外被（分枝狀寡糖鏈）有關(guān)。

        凝集素（lectin）是一類含糖的（少數(shù)凝集素例外）并能與糖進(jìn)行專一性結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素促使細(xì)胞凝集主要是由于它能與細(xì)胞外被的糖分子相連接、在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖分子可以抑制細(xì)胞間的凝集反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)試劑

1. PBS緩沖液：稱取NaCl 7.2g、Na₂HP0₄ 1.48g、KH₂P0₄ 0.43g、加蒸餾水，定容至l000 mL中，調(diào)pH值到7.2。

2. 1%肝素溶液：稱取肝素鈉0.1g，定容至l0 mL生理鹽水中即可。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

 顯微鏡、托盤天平、載玻片若干、5mL注射器、滴管2支、離心管2支。

實(shí)驗(yàn)材料

 1. 土豆塊莖。

 2. 2% 紅細(xì)胞懸液 

        以無菌方法抽取兔子耳緣靜脈血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸潤）1mL，用生理鹽水洗5次，每次3000 r/min，離心5 min，zui后按沉淀壓積的紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成2％紅細(xì)胞懸液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 稱取土豆去皮塊莖2g，切成小塊
2. 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素）
3. 載玻片上滴一滴土豆凝集素 
4. 再滴一滴2％紅細(xì)胞液，充分混勻 
5. 靜置20 min 
6. 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象 
7. 以PBS液加2％血細(xì)胞懸液作為對照實(shí)驗(yàn)，低倍顯微鏡下觀察。