親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成,可以和4個(gè)生物素分子密切結(jié)合?,F(xiàn)在運(yùn)用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素(strepavidin)。生物素(biotin)又稱(chēng)維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物,生物素-羥基琥珀亞胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和酶等多種類(lèi)型的大小分子構(gòu)成生物素化的產(chǎn)品。親和素與生物素的結(jié)合,雖不屬免疫反應(yīng),但特異性強(qiáng),親和力大,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為安穩(wěn)。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子的結(jié)合方位,可以聯(lián)接更多的生物素化的分子,構(gòu)成一種類(lèi)似晶格的復(fù)合體。因而把親和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來(lái),就可大前進(jìn)ELISA的敏感度。
親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的運(yùn)用有多種形式,可用于直接包被,亦可用于終反應(yīng)擴(kuò)展??梢栽诠滔嗌舷阮A(yù)包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合,通過(guò)親和素-生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不只可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結(jié)合點(diǎn)充分露出。其他,在常規(guī)ELISA中的酶標(biāo)抗體也可用生物素化的抗體替代,然后聯(lián)接親和素-酶結(jié)合物,以擴(kuò)展反應(yīng)信號(hào)。
ELISA廣泛用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn). 在這種方法中, 一般標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的, 通過(guò)參與溶液相受體或蛋白質(zhì)來(lái)使之成鍵. 通過(guò)參與與受體特異性反應(yīng)的抗體來(lái)定量成鍵的受體, 而且開(kāi)端抗體的量以參與第二種能顯色的抗體測(cè)量. 第二種抗體能辨認(rèn)抗體的結(jié)束, 在其結(jié)束的堿性磷酸酯或過(guò)氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.
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