大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒應該怎么用?
α腫瘤壞死因子(TNF α)是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生的促炎細胞因子,并參與正常炎癥反應和免疫反應。α腫瘤壞死因子在許多病理狀態(tài)下產(chǎn)生增多,包括敗血癥、惡性腫瘤、心臟衰竭和慢性炎性疾病。在重癥類風濕關節(jié)炎患者的血液及關節(jié)中都可發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子增多。是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用zui強的生物活性因子之一。分為TNF-α,TNF-β兩種,TNF家族除這兩種外還發(fā)現(xiàn)約30種。
操作步驟
- 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
360ng/L | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
180ng/L | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
90ng/L | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
45ng/L | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
22.5ng/L | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
- 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
- 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
- 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
- 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
- 溫育:操作同 3。
- 洗滌:操作同 5。
- 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘。
- 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
- 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
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