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            DNA Marker的選購與問題解答

            來源:上海雅吉生物科技有限公司   2018年05月16日 09:41  

            一、novoprotein DNA Marker特點:

            • 每個條帶均為單獨定量制備
            • 可以用于 DNA段大小和濃度的判斷
            • 帶型清晰明亮、條帶大小準確,覆蓋范圍廣(100bp-10kb)
            • 明暗條帶優(yōu)化比例,條帶更美觀
            • 內(nèi)含上樣緩沖液和指示染料可直接上樣、快捷方便
            • 添加了特定穩(wěn)定劑,穩(wěn)定性高,于-20℃可保存兩年以上
            • 適用于 TAE 和 TBE緩沖體系
            • 可以任選條帶定制DIY DNA Marker
            • 價格優(yōu)勢明顯
               

            二、如何選擇novoprotein DNA Marker
            如圖為novoprotein 在售的18種DNA Marker,可以根據(jù)您的目的片段大小,選擇附近條帶較密的marker,這樣對目標片段大小的估計較準確。兩個不同目的帶同時電泳時,盡量選擇同時可以標定兩個目的片段的marker。如果您的實驗有特殊條帶需求,我們還可以為您提供DIY DNA Marker定制服務(wù)。
             


            (DNA Marker電泳圖)


            三、novoprotein DNA Marker使用方法及注意事項

            使用注意事項:

            • 建議選擇合適濃度的瓊脂糖凝膠(DNA段越短膠濃度越大:<0.5k,膠濃度1.2-1.5%;>10kb濃度,0.3-0.7%;0.5<DNA<10kb,膠濃度為0.8-1.0%)
            • DNA Marker使用前*化凍并混合均勻
            • 取5 μl直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中(約每1 mm點樣孔寬度加1 μl)進行電泳
            • 低電壓下不受場強影響,分離效果好。一般電壓4-10v/cm,大片段電泳時注意控制電壓。
            •  及時更換電泳緩沖液

            保存注意事項:

            4℃保存3個月以上,-20℃保存2年。(如客戶電泳使用頻繁可于室溫隨時使用,但我們推薦客戶于4℃存放)
            DNA Marker 加樣時盡量使用新槍頭,避免核酸酶污染

            四、DNA Marker使用問題解析

            • 條帶模糊 

            原因

            解決方案

            凝膠濃度不合適 

            根據(jù)片段長短選擇合適的凝膠濃度

            電泳緩沖液緩沖能力差 

            反復(fù)使用后緩沖能力下降需及時更換

            電壓過高時間過長

            電壓不應(yīng)該超過20V/cm,電泳溫度應(yīng)該低于30℃

            上樣量過多  

            減少上樣量以marker條帶為準條帶更清晰

            電泳膠質(zhì)量不好

            選擇好膠粉充分溶膠

            Marker降解

            防止核酸酶污染,確保保存溫度和時間


            • 亮度不夠或不均一

            原因

            解決方案

            上樣量少

            可適度增加上樣量

            EB濃度低

            按照要求加入EB,一般為終濃度0.5-1ug/ml

            凝膠不均勻,膠質(zhì)過厚

            充分煮膠至透明無雜質(zhì)和絲狀物,倒膠均勻適量

            電泳膠亮度不均一

            電泳時間過長時,瓊脂糖膠前部EB會遷移至膠后部,造成前后DNA染色亮度不一,可在電泳開始前,在瓊脂糖膠前部,靠近電泳槽陽極附近加入少量EB并混勻。


            • 條帶污染

            原因

            解決方案

            污染核酸外切酶至DNA降解

            使用滅菌的槍頭,及時蓋緊管蓋

            點樣時污染

            加樣時及時更換槍頭

             

            五、Marker條帶比較分析

            對市場上熱銷DNA Ladder 2000同類型產(chǎn)品調(diào)查對比見下表:


            公司名稱

            次數(shù)

            目錄價

            定量條帶(標稱)

            普通條帶(標稱)

            備注

            Takara

            40

            85

            30ng/ul

            10ng/ul

            5ul電泳,亮帶150ng,其余50ng

            康為世紀

            50

            48

            30ng/ul

            10ng/ul

            5ul電泳,亮帶150ng,其余50ng

            東盛

            60

            90

            30ng/ul

            15ng/ul

            5ul電泳,亮帶150ng,其余75ng

            SinoBio

            50

            70

            20ng/ul

            10ng/ul

            5ul電泳,亮帶100ng,其余50ng

            全式金

            50

            70

            20ng/ul

            10ng/ul

            5ul電泳,亮帶100ng,其余50ng

            天根

            50

            90

            17ng/ul

            8ng/ul

            6ul電泳,亮帶100ng,其余50ng

             

            由表中可以看出,我們的marker濃度在市場上位于中等水平,從價格來看也比較有優(yōu)勢,且我們的活動力度較大。(目前marker產(chǎn)品,買二送二

            為了取得美觀的DNA Marker電泳分布圖譜,我們在產(chǎn)品制備過程小幅度調(diào)整了非定量條帶的濃度,結(jié)果使定量條帶更醒目,相對其他條帶更易區(qū)分。


            • Marker條帶電泳圖譜比較

             

            • Novoprotein新產(chǎn)品DNA Ladder 2000 plus II
            • 2、Novoprotein DNA Ladder 2000
            • 3、T 1公司同類型 Marker DL2000
            • 4、T 2公司同類型 Marker D2000


             

             

             




            (1%瓊脂糖膠,2ul電泳可見novoprotein DNA marker條帶清楚,帶型美觀。)

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