GelRed 和GelGreen是設(shè)計(jì)以取代劇毒的代替高毒性的溴化乙錠（EtBr）的新一代核酸凝膠熒光染料。Biotium科學(xué)家研發(fā)的GelRed 和GelGreen集低毒性、高靈敏性和出色的穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)于一體，效果由于EtBr及其他EtBr替代品。

幾十年來，EtBr因極其低廉的價格，一般的靈敏度，一直被用作核酸凝膠染色的主要染料。然而EtBr是一個高度誘變的物質(zhì)。該染料的使用安全隱患，凈化及廢物處置的相關(guān)費(fèi)用等，終導(dǎo)致其代價高昂。正因如此，近年來市場上出現(xiàn)了一些替代品，如SYBR系列染料等。盡管這些替代染料減少了致突變性，但卻喪失了染料其他方面的功能。例如，SYBR Safe的靈敏度很低，SYBR Green及SYBR Gold的穩(wěn)定性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于EtBr。SYBR染料能快速的進(jìn)入細(xì)胞，結(jié)合線粒體及細(xì)胞核DNA，是的染料在一定濃度是有毒的。事實(shí)上，在紫外線或其他誘變劑誘導(dǎo)下，SYBR Green I 強(qiáng)烈的突變性已經(jīng)被廣泛認(rèn)知。（Ohta，et al.Mut Res 492,91(2001)）

為了保證GelRed和GelGreen的安全性，Biotium的科學(xué)家采用一種新型非常簡單的概念：阻止染料進(jìn)入活細(xì)胞減少遺傳毒性。我們相信，不給DNA結(jié)合染料滲透活細(xì)胞中結(jié)合基因組DNA的機(jī)會，便可以保證染料沒有或大幅度減少其誘變性作用。因此，我們設(shè)計(jì)的GelRed和GelGreen 染料擁有*化學(xué)結(jié)構(gòu)保證其無法滲透細(xì)胞膜。Ames試驗(yàn)驗(yàn)證即使?jié)舛冗h(yuǎn)遠(yuǎn)高于實(shí)驗(yàn)者操作凝膠染色的工作濃度，GelRed和GelGreen也無誘變性。此外，環(huán)境的安全性試驗(yàn)表示，GelRed和GelGreen是*無害的，對水生生物無毒。因此，廢棄的GelRed和GelGreen可以直接倒入下水道，或按照普通垃圾處理。

無論是作為預(yù)制凝膠染料染色或電泳后染色，GelRed和GelGreen染料都是搞靈敏度的。312/302nm的紫外光透射下，GelRed靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過EtBr，與SYBR Gold靈敏度相當(dāng)，后凝膠染色法GelRed效果更明亮。與SYBR Gold不同的是，GelRed 也可以被作高度靈敏的與之驚叫預(yù)制凝膠染色。GelGreen是用于488nm激光凝膠掃描儀或者可見藍(lán)光激發(fā)的Dark Reader 的研究人員使用要求。GelGreen光譜類似于SYBR Safe，但比后者更為靈敏。

GelRed和GelGreen另一個主要優(yōu)勢是其顯著的穩(wěn)定性?？梢杂貌僮鱁tBr同樣的方式操作兩種染料。這意味著，染料在水中是非常穩(wěn)定的，可以在室溫下長期儲存，也可以在微波中加熱進(jìn)行預(yù)制凝膠。這兩種燃料也非常耐光，暴露在室內(nèi)燈光下也比較穩(wěn)定。

EB GelRed SYBR Safe GelGreen

圖1. GelRed 和GelGreen比EB和SYBR Safe更靈敏。左圖：比較了GelRed 和EB 的1%預(yù)制膠，TBE緩沖液跑膠。右圖：比較了GelGreen和SYBR Safe 1%瓊脂糖凝膠的后染狀況，同樣在TBE緩沖液中完成。選用了Invitrogen的1 Kb的DNA Ladder作2倍稀釋，分別加入四個泳道中，從左向右依次為200ng，100ng，50ng和25ng。

圖2. 在37°C下，分別使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 對HeLa 細(xì)胞進(jìn)行孵化，并分別在5分鐘（A)和30分鐘（B）后觀察。實(shí)驗(yàn)顯示SYBR染料迅速進(jìn)入細(xì)胞并將細(xì)胞內(nèi)的核酸染成亮綠色（以上僅圖示 SYBR Green 1），而 GelRed 和 GelGreen 則因?yàn)椴荒艽┩讣?xì)胞膜而*沒有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi), 足以證明GelRed和GelGreen是安全的。

圖 3. GelGreen （綠色） GelRed （紅色）在 PBS 緩沖溶液中結(jié)合 dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。

圖 4. 室溫下， GelRed （ 500 nm ）和 SYBR Gold （ 488 nm ）稀釋在 1 × TBE 凝膠染色液中測得的吸光度隨時間變化圖。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分別為 0.029 和 0.051 。

GelRed 和GelGreen特點(diǎn)：

比EtBr安全：

艾姆斯氏實(shí)驗(yàn)以及其他實(shí)驗(yàn)證實(shí)無誘變性無細(xì)胞毒性；

方便處理：

通過了環(huán)境安全實(shí)驗(yàn)，可以直接丟棄無需特殊處理。

超高的靈敏度：

比EtBr和SYBR Safe更靈敏。

*的穩(wěn)定性：

溶于水中，室溫下能長期保存，微波爐加熱性能穩(wěn)定。

廣泛的適用性：

適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色。

簡單的步驟：

預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色。

兼容標(biāo)準(zhǔn)紫外凝膠成像系統(tǒng)及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置：

使用312nm激發(fā)的UV凝膠成像系統(tǒng)時，GelRed可以替代EB;無需改變成像條件；GelRed 可用EB常用儀器觀察；GelGreen可用SYBR染料儀器進(jìn)行觀察。GelRed 可以替代 EB ； GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料。

可用于下游實(shí)驗(yàn)：

普通的膠回收后，可用于下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品信息：