免疫組化雙染試劑盒組成：

即用型過氧化酶阻斷劑  6ml 
即用型正常動物非免疫血清       12ml 
即用型生物素標(biāo)記的第二抗體     12ml 
即用型鏈霉菌抗生物素蛋白-堿性磷酸酶 6ml 
即用型堿性磷酸酶顯色液    6ml 
即用型雙染增強(qiáng)液          6ml        
即用型鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶6ml 
過氧化酶底物緩沖液 1.5ml 
過氧化酶底物       1.5ml 
過氧化酶染色液       1.5ml 
即用型蘇木素復(fù)染液  6ml 
即用型水性封片劑     6ml 

免疫組化雙染試劑盒的實(shí)驗(yàn)流程:

脫蠟和水化
方法同SP法。
抗體的染色
1.將切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10 min，PBS沖洗3 min×3次；
2.加100 ul（2滴）血清封閉溶液到切片上，室溫孵育10 min，倒掉（不能沖洗）；
3.加入一抗（按照說明書推薦濃度和孵育條件）；
4.使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗5 min×3次；
5.加入100 ul（2滴）生物素化的二抗，室溫孵育10 min；
6.用TPBS沖洗5 min×3次；
7.加入100 ul（2滴）鏈霉親和素-AP的二抗，室溫孵育10 min；
8.用TPBS沖洗5 min×3次；
9.準(zhǔn)備底物溶液：將1滴試劑4A和4B加入到1 ml去離子水中，充分混勻。再加入1滴試劑4C，充分混勻；
10.加100 ul（2滴）配好的AP底物溶液，室溫孵育；
11.使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應(yīng)。
第二抗體的染色
12.加100 ul（2滴）雙染增強(qiáng)劑，孵育；
13.用TPBS沖洗3 min×3次；
14.加100 ul（2滴）血清封閉溶液到切片上，室溫孵育10 min，倒掉（不能沖洗）；
15.加入稀釋好的一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）；
16.用TPBS沖洗5 min×3次；
17.加入100 ul（2滴）生物素化的二抗，室溫孵育10 min；
18.用TPBS沖洗5 min×3次；
19.加入100 ul（2滴）鏈霉親和素-HRP的二抗，室溫孵育10 min；
20.用TPBS沖洗5 min×3次；
21. 準(zhǔn)備底物溶液：將1滴試劑6A和6B加入到1 ml去離子水中，充分混勻。再加入1滴試劑6C，充分混勻；
22、 加100 ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室溫孵育；
23.使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應(yīng)；
24.使用復(fù)染試劑染色（根據(jù)需要選擇）；
25.封片劑封片，顯微鏡觀察并拍照。