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            醇脫氫酶(ADH)測試盒 微量酶標(biāo)儀法 說明 技術(shù)文章

            來源:上海索寶生物科技有限公司   2019年04月10日 10:15  

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            乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒

            商品貨號:MS1007
            英文名稱:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
            別名:乙醇脫氫酶試劑盒 ADH Kit 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒
            檢測方法:微量法

             

            商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
            MS1007-100管/96樣索橋生物100管/96樣¥550.00元 

            測定意義:

            ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

            測定原理:

            ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計算ADH活性。

             

            貨號:MS1007                                                     規(guī)格:100管/96樣

            乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒說明書

            微量法

            注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

            測定意義:

            ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

            測定原理:

            ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計算ADH活性。

            自備實驗用品及儀器:

            研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

            試劑組成和配制:

            試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

            試劑二:液體×1瓶,4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中,4℃保存。                  

            試劑三:粉劑×1支,-20℃保存。

            試劑四:液體×1支,4℃保存。

            粗酶液提?。?/span>

            1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4離心20min,取上清置冰上待測。
            2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

            3、血清等液體:直接測定。

            ADH測定操作:

            1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

            2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。

            3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。

            4. 測定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。

            注意:空白管只需測定一次。

            計算公式:

            a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

            (1)按照蛋白濃度計算

            活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷Cpr

            (2)按照樣本質(zhì)量計算

            活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷W

            (3)按細胞數(shù)量計算

            活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷細胞數(shù)量

            (4)按液體體積計算

            活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管)

            ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。

            b.使用96孔板測定的計算公式如下

            (1)按照蛋白濃度計算

            活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷Cpr

            (2)按照樣本質(zhì)量計算

            活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷W

            (3)按細胞數(shù)量計算

            活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管) ÷細胞數(shù)量

            (4)按液體體積計算

            活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

            ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T

            =1.61×(△A測定管△A空白管)

            ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。

            注意事項:

            1. 上清液蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
            2. 配制好的試劑二3天使用完。
            輔酶Ⅰ系列    
            QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
            MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
            QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
            MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
            QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
            MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
            QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
            MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
            QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
            MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
            QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
            QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
            MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
            QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
            MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
            QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
            MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
            QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
            MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
            QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
            MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
            QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
            MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
            QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
            MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500

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