研域教您如何選擇二級試劑

   常見實驗中，各實驗標本測試免疫化學技術(shù)能否成功檢驗，取決于我們購買試劑時所選的試劑是否為特異性好的二級試劑，二級試劑用于鑒定免疫染色和免疫印跡中未標記的*抗體的位置。以下根據(jù)我司研究人員總結(jié)實驗方法，選擇*二級試劑時主要應(yīng)考慮4個方面的因素：①與抗體相互作用的特異性； ②商業(yè)來源試劑的滴度；③檢測試劑的靈敏度；④二級試劑所產(chǎn)生的背景。

 
 一、特異性

   影響選擇二級試劑的zui后一個因素是其識別*抗體的特異性。如果需要在含有其他競爭性的蛋白中識別*抗體時，測定交叉反應(yīng)極為重要。zui常見的情況是免疫染色樣本中含有來自宿主器官的抗體，或是雙抗體標記的熒光試驗

二、商業(yè)來源試劑的滴度

   分析不同廠商的產(chǎn)品需考慮的一個重要因素是使用該試劑的有效滴度，例如1mg標記抗體的成本在不同的廠家差異很大。某些商業(yè)化抗體，雖然其單位重量成本較高，但一般可作10倍稀釋后使用，故此類試劑更具有應(yīng)用價值。

   此外，使用較高稀釋倍數(shù)的二級試劑可產(chǎn)生更清晰的背景。因此，應(yīng)選擇能在較低滴度使用的二級試劑。所有的稀釋一定要使用含蛋白的緩沖液，例如含3％BSA的PBS，低濃度蛋白有變性的傾向，增加了非特異性相互作用的可能性，抵消了高倍稀釋的優(yōu)勢。

 
三、商業(yè)來源試劑的靈敏度

   二級試劑的靈敏度取決于兩方面的因素，即選擇適當?shù)臉擞浳锛笆煜さ呐悸?lián)技術(shù)。應(yīng)通過比較不同的商業(yè)貨源測試第二試劑標記的偶聯(lián)效果。
    
   從不同的公司購買數(shù)批有效的二級試劑，并在相同的實驗室條件下做對比試驗，此類試驗應(yīng)該穩(wěn)定可靠，容易重復(fù)。盡量從不同的公司選擇合適的供應(yīng)批次，通過鑒定證實一批好試劑后，應(yīng)根據(jù)需要購買，并留少量樣品作為下次試驗的標準。一旦選定較好的批號，應(yīng)與廠商保持。

 
四、二級試劑產(chǎn)生的背景

   在任何試驗中由二級試劑引起的背景問題可以設(shè)立不加*抗體的對照評估。*的二級試劑在無*抗體存在時應(yīng)不產(chǎn)生可檢測的信號。實際上，很少能獲得這種理想的結(jié)果，但一個良好的二級試劑本身所產(chǎn)生的背景應(yīng)當相當?shù)汀?/p>

   長期存放的二級試劑常發(fā)生凝聚或變性，所以連續(xù)監(jiān)測背景就顯得特別重要，這不僅在評價有效的商用二級試劑時極為重要，在實驗中也應(yīng)作為常規(guī)要求。這對細胞和組織免疫染色特別適合，因此在每一次試驗中，應(yīng)將不加*抗體作為對照。

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