幾種核酸染料的比較

1、EB（溴化乙錠）

溴化乙錠是一種高度靈敏的嵌入性熒光染色劑，為強(qiáng)致癌誘變劑，但價(jià)格便宜。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。EB的這種特性使其成為一種核酸染料，常用于瓊脂糖凝膠電泳中的核酸染色。溴化乙錠在紫外區(qū)302nm和366nm處有吸收峰，在紫外光的照射下，溴化乙錠可被激發(fā)出橙紅色的熒光（590nm）。結(jié)合有DNA的溴化乙錠復(fù)合物的熒光強(qiáng)度要比沒有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍，因此溴化乙錠可檢測(cè)到少10ng的DNA條帶，非常靈敏。

2、Gel Green和Gel Red

由Biotium公司研發(fā)推出的EB替代染料，染色效果和EB差不多，在紫外下不容易淬滅，可以用于膠回收。但價(jià)格較貴。

GelRed 和 GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定性于一身的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。其特點(diǎn)有：

1）高靈敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中靈敏的凝膠核酸染料之一；

2）穩(wěn)定性*：可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存；

3）更安全：艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠（EB）；

4）廣泛的適應(yīng)性：適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色；

5）染色過程簡(jiǎn)單：與EB一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗；

6）對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響?。簩?duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I?；

7）與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容：使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí)，GelRed 可以的替代EB；使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí)，GelGreen 足以替代任意一種 SYB染料。但該染料會(huì)使小片段DNA遷移慢一些（與EB相比).

3、綠色熒光核酸染料

綠色熒光核酸染料對(duì)于大片段DNA的染色效果良好，但是在對(duì)于500bp以下的片段效果不是很好，還有一個(gè)很致命的弱點(diǎn)是它的熒光基團(tuán)在紫外燈下非常容易淬滅，一般5-10min條帶就會(huì)消失。另外綠色熒光核酸染料不適用于膠回收。

4、SYBR Green 和SYBR Gold

穩(wěn)定性差，也有毒性。它屬于花箐素類核酸染料，花箐類染料不是無毒的，而只是低毒的，電泳的是經(jīng)過修飾的，修飾有三種：1.加入鹵素或氰基。2.插入環(huán)羥基。3.加入穩(wěn)定劑。SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡(jiǎn)單：無須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。SYBR Green和SYBR Gold相對(duì)于EB的穩(wěn)定性要差很多。SYBR系列的染料也能進(jìn)入細(xì)胞染色線粒體以及核內(nèi)的DNA，從而產(chǎn)生危害。SYBR Green I已被證實(shí)在紫外光下將會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)誘變能力，使DNA或其他物質(zhì)發(fā)生突變。

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