HPLC(液相色譜)是實(shí)驗(yàn)室重要的 “分離”手段,而色譜柱則堪稱(chēng)分離的心臟。日常使用HPLC不免會(huì)遇到由色譜柱引起的各種故障,因此提前做好維護(hù)保養(yǎng)色譜柱的工作十分重要。
一、試驗(yàn)樣品需過(guò)濾
若試驗(yàn)樣品中的不溶物進(jìn)入色譜柱,則會(huì)引起入口過(guò)濾器及填料堵塞,柱壓上升,從而破壞分離,因此樣品應(yīng)盡可能以清潔的狀態(tài)注入。不論在什么情況下,建議用0.5µm左右的過(guò)濾器過(guò)濾一下樣品。
二、謹(jǐn)防色譜柱污染
有時(shí)樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾,仍會(huì)發(fā)生色譜柱堵塞、污染等情況,這可能是由于樣品中存在的夾雜物使溶解性差的成分向流動(dòng)相析離、被填料牢固保持的夾雜成分的吸附、微型注射器污染等原因引起的。所以在分析前使用過(guò)濾器和防護(hù)柱,將這些污染盡可能地除去,過(guò)濾器中通常裝有孔徑為 1µm 左右的濾網(wǎng),可有效除去引起堵塞的物質(zhì);防護(hù)柱是安裝在分析柱前面的短柱,起到捕捉牢固吸附于填料上夾雜成分的作用。
三、保證色譜柱潔凈
上面提到的防護(hù)柱其清除污染的作用有限,因此色譜柱在使用之后,當(dāng)根據(jù)樣品的不同,在每數(shù)次分析樣品之后進(jìn)行一次清洗。
四、色譜柱輕拿輕放
色譜柱中填滿了數(shù)微米大小的細(xì)小粒子,應(yīng)避免沖擊和外部壓力的急劇變化,防止損傷柱子。
五、確認(rèn)流動(dòng)相的制約
有時(shí)色譜柱會(huì)因流動(dòng)相的pH、有機(jī)溶劑量等受到制約,因此需充分確認(rèn)之后再使用。
六、按需要使用不同的色譜柱
若一支色譜柱用于各種分析,則前面的測(cè)試數(shù)據(jù)有時(shí)不會(huì)重現(xiàn)。此外,如果重復(fù)進(jìn)行流動(dòng)相條件差別較大的分析,也會(huì)加速色譜柱的劣化。因此請(qǐng)務(wù)必做好各個(gè)色譜柱的使用記錄。
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