單個二倍體細胞
在剖析單精zi曾經(jīng)，Li等人對個別二倍體細胞內(nèi)的β珠蛋白基因進行過研究。兩個組織培育細胞株用于這些試驗。其中一個純合是鐮刀型細胞密碼子6（βS）發(fā)作突變，另一個純合子則來源于正常的βB等位基因。擴增含有密碼子6的β珠蛋白片段的引物，及能夠區(qū)別這兩個特異的等位基因的寡核苷酸探針（ASO）現(xiàn)已報道過。βA純事細胞和βB純合細胞和βS純合細胞在同一組織培育瓶中一起培育數(shù)天。將用相差顯微鏡觀察到的混合培育的單個細胞轉(zhuǎn)入溥塑料胡管內(nèi)。

別離將單個細胞轉(zhuǎn)入含裂解液的PCR管中，保溫后，參加PCR緩沖液，緩中有四dDNP．Taq dna聚合酶和擴增已知珠蛋白基因的PCR引物。95℃10分鐘變性靶DNA，然后依據(jù)已發(fā)表方法的改進計劃進行50全循環(huán)的擴增。經(jīng)過打點雜交，等量的擴增產(chǎn)品打點于尼龍膜后，擴增產(chǎn)品別離與βA和βS的探針雜交。所剖析的37個細胞中，84％細胞只與βA和βS探針雜交，雜交強弱各不相同；19個與βA探針．12個與βS探針雜交。

12個以水作空白對照的反響管中瓜呈陰性，它標明疏忽不記DNA的污染。沒有與兩種探針都雜交的樣品，它暗示轉(zhuǎn)入到反響管中的單個細胞，而且組織培育基中存在的從βA或βS細胞中裂解出來的 DNA并未吸附在單個細胞上。

單精zi的剖析

我司等人隨后對位于染色體19編碼LDL受體(LDLr)的基因的雜合體單精zi的基因型進行剖析。依據(jù)已知的DNA序列，他們用PCR和ASO剖析檢測LDLr的RFLP。PCR的引物和探針曾經(jīng)已有報道。單個精zi的別離與二倍體細胞的別離方法相同，經(jīng)蔗糖梯度 離心得到純化的精zi，精zi于－20℃可保藏8個月。

顯微鏡下將單個精zi吸入毛細塑 料針管內(nèi)，然后轉(zhuǎn)入試管內(nèi)以作裂解。裂解的方法與發(fā)表的方法沖液(50mM KCL， 10mM Tris.HCL，pH8.3，2.5mM MgCl2，0.1mg/ml明膠），0.05mg/ml蛋白酶K，20mM DTT和1.7μM SDS。37℃保溫1小時，參加pcr反響物曾經(jīng)，樣品加熱到85℃。PCR擴 增。

對80個精ziLDLr基因型已作過剖析。55%的雄配子顯示出雜交信號。22個帶著 LDLr等位基因，21個帶著LDLr2基因。僅一個與兩種探針雜交都呈陽性。16支對照反 應(yīng)管中參加所有反響試劑但沒有精zi，結(jié)果無雜交信號出現(xiàn)。