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            技術(shù)服務 酵母雙雜交篩選服務

            來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2020年05月14日 16:24  

            蛋白的酵母雙雜交實驗是以酵母的遺傳分析為基礎(chǔ),研究蛋白間相互作用的一種有效技術(shù)手段。轉(zhuǎn)錄活化蛋白可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動相應基因的轉(zhuǎn)錄反應。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由其上兩個相互獨立的結(jié)構(gòu)域,即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(Activation Domain,AD)共同完成的。

              以Gal4系統(tǒng)為例,BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個結(jié)構(gòu)域(1-147aa與768-881aa)構(gòu)成。在利用GAL4系統(tǒng)篩選cDNA文庫或研究蛋白間的相互作用時,DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與靶蛋白即"誘餌"相結(jié)合,轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結(jié)合。一般情況下,單獨的BD可以與GAL4上游活化序列(GALUAS)結(jié)合但不能引起轉(zhuǎn)錄,單獨的AD則不能與GAL UAS結(jié)合;只有當BD與AD分別表達的融合蛋白由于相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時,BD與AD才能與GAL UAS結(jié)合并且引起報道基因的轉(zhuǎn)錄,從而激活下游報告基因,通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

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