凱氏定氮法是測量蛋白質(zhì)含量的方法之一,也是常用的,國內(nèi)外普遍應(yīng)用的方法。
凱氏定氮法原理:蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解,分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)含量。
凱氏定氮法中的常量,微量,和半微量區(qū)別:
1、區(qū)別在于檢測用樣品量,你可以按標準進行操作,沒有必要拘泥于某一方法,主要看你樣品量是否足夠
2、常量由于可以把全部消化液一同蒸餾測定,故較適合蛋白質(zhì)含量低的樣品.
3、微量、半微量差別在裝置上,二者皆屬于水蒸汽蒸餾操作,只是前者把蒸汽直接導(dǎo)入反應(yīng)室內(nèi),后者把蒸汽導(dǎo)入反應(yīng)室外加熱,由于二者皆取消化液的一部份操作,可平行蒸餾操作,但檢測限要較常量法高.
4、純粹從回收率的角度看,半微量要稍好.
賽亞斯凱氏定氮儀KDN-4C概述:
KDN凱氏定氮儀是依據(jù)經(jīng)典(凱氏定氮)方法設(shè)計的自動測氮蒸餾系統(tǒng)。儀器主要工作流程有:自動加水(含自動水位檢測功能)、自動加堿(按鈕控制)、手動加酸(手工配置)、自動蒸餾(按鈕控制)等幾部分。該儀器操作簡單;使用安全、可靠;省時、省力;適用于糧油檢測、飼料分析、植物養(yǎng)分測試、土肥檢測、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的分析、教學(xué)及研究中,是操作使用人員的理想工具。2.工作原理 (凱氏原理):
蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。食品和硫酸及催化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解,分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后在堿化蒸餾作用下使氨游離,釋放出來的氨氣和水蒸氣一起經(jīng)過冷凝管冷凝后,進入裝有硼酸的錐形瓶中。被硼酸吸收后再用硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即得到蛋白質(zhì)含量。
2.1.(消化爐部分)有機物中的銨根在強熱和催化劑及濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反應(yīng)式為: 2NH2-+H2S04+2H+=(NH4)2S04
2.2.(蒸餾器部分)裝有消化后樣品的消化管在高溫蒸汽作用下與堿作用,放出NH3 和水蒸氣,收集于H3BO3 溶液中
反應(yīng)式為: (NH4)2SO4+2NaOH高溫蒸汽=2NH3↑+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
2.3. (滴定部分)用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,根據(jù)HCI消耗量計算出氮的含量,然后乘以相應(yīng)的換算因子,得到蛋白質(zhì)的含量
反應(yīng)式為: (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
3.操作步驟:
取樣→ 消化 → 蒸餾→ 滴定 → 計算
4.整套儀器組成:
含消化爐(本公司供選配KDN-04C、KDN-08C、KDN-20C等消化爐型號)和KDN系列凱氏定氮儀蒸餾器組成。
二.技術(shù)參數(shù)
1.測定品種:糧食、飼料、食品、乳制品、飲料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學(xué)品等。
2.工作方式:半自動。
3.測定數(shù)量:采用單個連續(xù)蒸餾測量。
4.測定范圍:含氮在0.1~200mgN(毫克氮) (含氮量0.1%~99%)
5.回收率:≥99%(相對誤差,包括消化過程)
6.重復(fù)率:相對標準偏差<±1%
7.工作時間:蒸餾時間5-15分鐘( 根據(jù)樣品和含氮量的不同而定)
8.額定電壓: 220V/50Hz。
9. 額定功率:800W
10.冷卻水消耗: 3-4L/min(水溫低于25度)
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