Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)

Easy-Lowry Protein Assay Kit

Easy-Lowry蛋白定量試劑盒

目錄號(hào)：K2341

保存：BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：2-8℃

其  它 組  分：室  溫

 組分說(shuō)明

Cat. No.                    K2341

Kit Size                    1000 次/微孔，50 次/試管

試劑 A                        50 ml

試劑 B                        25 ml

BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 （2 mg/ml）     2 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡(jiǎn)便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒，可用于多種不同緩沖系統(tǒng)以及各種不同蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化改良的產(chǎn)品，其保留了Improved-Lowry 抵抗干擾能力較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，并進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作步驟，減少了檢測(cè)時(shí)間，并且能得到與mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結(jié)果，其檢測(cè)范圍為 0-2000 μg/ml。

 注意事項(xiàng)

  1.  本產(chǎn)品可以采用分光光度計(jì)（試管檢測(cè)法）或者酶標(biāo)儀（微孔檢測(cè)法）測(cè)定蛋白濃度。

 2.  建議每次測(cè)定蛋白樣品時(shí)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。

 3.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋?zhuān)?/span>

 4.  如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見(jiàn)附表 1），可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。  

 操作步驟

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

管號(hào)        稀釋液用量（μl）BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl）   BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/μl）

A                  0                 200                       2

B                 200                200                       1

C                 200          200（從B管中?。?              0.5

D                 200          200（從C管中?。?             0.25

E                 200          200（從D管中?。?             0.125

F                200                 0                         0（空白）

 2.  稀釋試劑 B：將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。

 3.  定量檢測(cè)：

 3a.  試管檢測(cè)法（蛋白濃度檢測(cè)范圍：0-2 μg/μl）

    1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各 200 μl  分別加到作好標(biāo)記的試管中。

    2）向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻，室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。

    3）向各試管中加入 4 ml 稀釋過(guò)的試劑 B，迅速在渦旋儀上混勻，室溫靜置 30 分鐘。

    4）用分光光度計(jì)測(cè)定 750 nm 下的吸光度值。

    5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

 3b.  微孔檢測(cè)法（蛋白濃度檢測(cè)范圍：0-2 μg/μl）

    1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。

    2）向各微孔中加 50 μl 試劑 A，迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻，室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。

    3）向每孔中加入 200 μl 稀釋過(guò)的試劑 B，迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻，室溫靜置 30 分鐘。

    4）用酶標(biāo)儀測(cè)定 750 nm 下的吸光值。

    5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

注意：

  1）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

  2）由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線(xiàn)性曲線(xiàn)的應(yīng)舍去。

  3）未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程中計(jì)算得出,  實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

  4）如果得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。  

                          附表 1.干擾物附表

    化合物               耐受濃度                化合物               耐受濃度

                          緩沖液                               去垢劑及變性劑

    磷酸鉀                0.03 M           去氧膽酸鈉               0.0625%

    甘氨酸               0.25 mM             CHAPS              1 mM

    HEPES              2.5  μM            辛葡糖                 干擾

     MES               25  μM              SDS               1.25%

    MOPS               25  μM          Triton X-100          0.25%

  Na +-檸檬酸                 2.5  μM          糖類(lèi)

    PIPES              5  μM             葡萄糖               30 mM

    磷酸鈉               0.25  μM             蔗糖               10  μM

    螯合劑

      TES               1 mM

      Tris             250  μM             EDTA             125  μM

                           鹽類(lèi)       EGTA               干擾

                                                   還原劑

    硫酸銨                28  μM

     NaCl              30  μM           β-巰基乙醇              1.75mM

     尿素                200  μM             DTT              50  μM

                                                    其他

                          極性化合物

     丙酮                 1.25%            丙烯酰胺             1.25 mg/ml

    DMSO                6.20%              DNA            190  μg/ml

     乙醇                12.50%              脂類(lèi)                25mM

1,2-亞乙基二醇               0.25%           兩性電解質(zhì)                 干擾

     甘油                  25%             中性 TCA           12.5 mg/ml

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