手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟
說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟。
1、復(fù)蘇細(xì)胞：在37℃水浴中快速搖動裝有1mL細(xì)胞懸液的冷凍管融化，加入5mL培養(yǎng)基并充分混合。在1000RPM下離心5分鐘，棄去上清液，加入4-6mL*培養(yǎng)基并充分吹掃。然后將所有細(xì)胞懸浮液添加到培養(yǎng)瓶中，并培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸浮液添加到6cm皿中）并培養(yǎng)過夜。第二天換培養(yǎng)基，檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)到80％-90％，則可以傳代培養(yǎng)。
對于貼壁人表皮永生化細(xì)胞HACAT ，傳代可參考以下方法：
?。?）棄去培養(yǎng)上清液，并用不含鈣和鎂離子的PBS沖洗細(xì)胞1-2次。
?。?）向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml消化液（0.25％胰蛋白酶-0.53mMEDTA），將其置于37℃的培養(yǎng)箱中1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化情況，如果大部分細(xì)胞旋轉(zhuǎn)并掉落后，迅速將其帶回手術(shù)臺，輕敲培養(yǎng)瓶幾次，并加入5ml以上含10％血清的*培養(yǎng)基終止消化。
?。?）輕輕吹干細(xì)胞，然后將其*吸出。以1000RPM離心8-10分鐘，棄去上清液，加入1-2mL培養(yǎng)基并充分吹掃。
?。?）加入5-6ml/瓶培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶，其中裝有5-6ml培養(yǎng)液的比例為1：2至1：5。
對于懸浮人表皮永生化細(xì)胞HACAT，傳代可參考以下方法：
?。?）收集細(xì)胞，以1000RPM離心8-10分鐘，棄去上清液，并加入1-2mL培養(yǎng)基吹凈，然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶，其中含有8ml培養(yǎng)基，比例為1：2至1：5。
?。?）可以選擇一半的介質(zhì)更換方法。丟棄一半培養(yǎng)基后，懸浮剩余的細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸浮液分成新的含有8ml培養(yǎng)基的細(xì)胞懸浮液，比例為1：2至1：3。在盤子或瓶子里。
3、細(xì)胞凍存：當(dāng)細(xì)胞生長良好時，可以將其冷凍保存。將貼壁細(xì)胞冷凍保存后，棄去培養(yǎng)基并加入少量胰蛋白酶。細(xì)胞變成圓形并脫落后，通過離心收集它們。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心