熒光定量PCR，你了解多少

來源：匯像智能科技（上海）有限公司 2020年11月25日 11:11

實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。

技術(shù)原理：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入平臺期。將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋進(jìn)行Real Time PCR，按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴(kuò)增曲線。Ct值與起始模板數(shù)的對數(shù)值之間存在線性關(guān)系，可以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知濃度的樣品也得到Ct值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以求出未知樣品的起始模板量。

PHS智能熒光定量PCR儀主要用于基因擴(kuò)增檢測，通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或探針等試劑，熒光型號不斷累積實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增反應(yīng)全過程，通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，終達(dá)到檢測目標(biāo)基因的目的。用于基因定性定量分析，基因檢測，基因分型，SNP分析（單核苷酸的多態(tài)性），RFLP多態(tài)性分析（限制性片段長度多態(tài)性），基因表達(dá)研究，高通量基因表達(dá)譜研究，以及STR鑒定等檢測。

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