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            哺乳動(dòng)物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)有人想知道嗎

            來(lái)源:賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司   2021年04月14日 16:09  
               哺乳動(dòng)物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)則是通過(guò)脂質(zhì)體或者是PEI的等轉(zhuǎn)染試劑在體外通過(guò)和質(zhì)粒形成復(fù)合體, 將質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。稱(chēng)為瞬時(shí)表達(dá)的原因是因?yàn)橘|(zhì)粒在真核細(xì)胞中不能擴(kuò)增。并且不斷被細(xì)胞所降解,這種表達(dá)在一定的時(shí)間后就會(huì)消失。除非質(zhì)粒被整合進(jìn)入細(xì)胞的基因組,通過(guò)質(zhì)粒上帶的篩選標(biāo)記,通過(guò)篩選得到一株穩(wěn)定表達(dá)你的目的蛋白的細(xì)胞克隆。但是這種細(xì)胞克隆的表達(dá)量相比瞬時(shí)表達(dá)會(huì)非常低甚至于檢測(cè)不到。真核表達(dá)的特點(diǎn)是所表達(dá)的蛋白一旦表達(dá)即擁有相應(yīng)的生物學(xué)活性,因此真核瞬時(shí)轉(zhuǎn)染往往用于研究單個(gè)基因在細(xì)胞中的功能。而不能用于純化蛋白。
              此外,哺乳動(dòng)物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)還有用于昆蟲(chóng)細(xì)胞的桿狀病毒表面展示系統(tǒng),其本質(zhì)也是通過(guò)轉(zhuǎn)染含有目的基因的重組質(zhì)粒(特殊質(zhì)粒,用于桿狀病毒表面展示系統(tǒng))給昆蟲(chóng)細(xì)胞,然后使用野生型的桿狀病毒或者是人工改造過(guò)的桿狀病毒來(lái)感染相應(yīng)的細(xì)胞,來(lái)是病毒和質(zhì)粒在昆蟲(chóng)細(xì)胞體內(nèi)發(fā)生重組,獲得目的基因,并且最終表達(dá)于病毒子的表面,所以成為表面展示系統(tǒng)。
              哺乳動(dòng)物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性:哺乳動(dòng)物為真核細(xì)胞,細(xì)胞器可以對(duì)蛋白正確折疊加工。表達(dá)水平高:載體可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高表達(dá)重組蛋白,表達(dá)量可高達(dá)1-3g/L蛋白表達(dá)高效穩(wěn)定:高效啟動(dòng)子控制,穩(wěn)定表達(dá),并可以選擇多種表達(dá)系統(tǒng)選項(xiàng):瞬時(shí)表達(dá)、穩(wěn)定細(xì)胞株表達(dá)、營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞株表達(dá)、大規(guī)模懸浮細(xì)胞表達(dá)等適合大規(guī)模蛋白表達(dá):常用的哺乳動(dòng)物表達(dá)宿主細(xì)胞,使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng),可以在一個(gè)月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級(jí)蛋白。
             

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