FLASH色譜純化實(shí)驗(yàn)小講堂：FLASH C18色

譜柱使用注意事項(xiàng)

色譜分類中，固定相極性強(qiáng)于流動(dòng)相的分離模式被稱為正相分離模式，固定相極性弱于流動(dòng)相的分離模式稱為反相分離模式。作為反相色譜固定相中的一種，C18是一種基質(zhì)（常用基質(zhì)是硅膠）上鍵合十八烷基基團(tuán)的色譜固定相，與昂貴動(dòng)輒幾萬(wàn)的高壓C18柱相比，F(xiàn)LASH C18色譜柱有價(jià)格優(yōu)勢(shì)。盡管C18的價(jià)格在FLASH色譜柱中偏高，但由于出色的分離能力等因素，C18的應(yīng)用范圍越來(lái)越廣泛。本文將介紹FLASH C18色譜柱的使用注意事項(xiàng)、使用維護(hù)方法以保持更長(zhǎng)使用壽命并獲得很好的分離效果。

編者語(yǔ)：FLASH（中低壓快速制備液相）色譜純化是色譜制備純化中性價(jià)比高、應(yīng)用范圍廣的一種色譜純化手段。

使用前預(yù)平衡：

首先，新FLASH C18色譜柱須用甲醇或乙腈試劑低流速?zèng)_洗4~6個(gè)柱體積，使固定相能充分潤(rùn)濕、讓碳鏈?zhǔn)嬲归_來(lái)以激活分離柱內(nèi)填料表面鍵合的官能團(tuán)，使色譜柱性能達(dá)到良好狀態(tài)。其次，使用甲醇/水（體積比1:1）或乙腈/水（體積比1:1）體系繼續(xù)對(duì)分離柱沖洗2個(gè)柱體積。最后，使用即將在下一步Flash制備色譜中采用的起始流動(dòng)相對(duì)分離柱沖洗3~6個(gè)柱體積。

編者語(yǔ)：由于早期的C18的鍵合過(guò)程中會(huì)有殘留的一些鍵合試劑，因此很多使用者習(xí)慣用強(qiáng)溶解性溶劑進(jìn)行沖洗。但現(xiàn)在基本不會(huì)有殘留，所以是否仍使用強(qiáng)溶解性溶劑取決于使用者的個(gè)人習(xí)慣。注意：考慮到殘留的溶劑會(huì)讓硅膠基質(zhì)的填料凝固結(jié)塊，造成柱壓升高、效果變差以至無(wú)法使用，因此使用后，一定要用充分的甲醇將強(qiáng)溶劑沖洗出來(lái)。

使用過(guò)程中：水、酸、堿造成的影響

FLASH C18色譜柱水相影響：由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，在純水（或水比例大于95%)環(huán)境下，C18官能團(tuán)非極性排斥會(huì)使伸展?fàn)?/span>態(tài)的官能團(tuán)在排斥力的作用下“倒伏”，使分析物難以與C18官能團(tuán)接觸，保留時(shí)間提前，出現(xiàn)肩峰等峰型變差情況，因此，在分離中盡量減少高水相或純水相的分離時(shí)間。

編者語(yǔ)：水作為反相色譜流動(dòng)相中的弱溶劑，大比例水相是可以增加化合物的保留，所以一般FLASH色譜反相純化起始都是較大比例水相，這樣水相塌陷致使C18柱壽命變短的情況是常見(jiàn)的，使用者只要用純甲醇長(zhǎng)時(shí)間過(guò)渡既能恢復(fù)一定使用效果。

FLASH C18色譜柱酸的影響：由于C18的化學(xué)結(jié)構(gòu)是SI-O-C，在強(qiáng)酸條件容易斷裂致使C18脫離失去分離效果，所以C18常規(guī)要在PH2以上。如果必須用PH2以下的流動(dòng)相條件，建議用特殊鍵合工藝的C18，如多鍵鍵合C18（多層鍵合）。

FLASHC18色譜柱堿的影響：高PH條件下會(huì)破壞硅膠的SI-O-SI結(jié)構(gòu)，所以通常硅膠基質(zhì)的C18使用不能超過(guò)PH10。如果必須用PH10以上流動(dòng)相條件，建議選用非硅膠基質(zhì)的C18。

FLASH C18色譜柱鹽的影響：如分離中使用鹽成分，需用中等、高水相流動(dòng)相進(jìn)行充分的緩沖銜接，注意：不能用高有機(jī)相流動(dòng)相沖洗含鹽分的柱子，因?yàn)?/font>有可能析出鹽結(jié)晶而堵塞柱子或破壞柱床。

編者語(yǔ)：由于其配比復(fù)雜及后處理等因素，酸堿鹽在FLASH（中低壓快速制備液相）色譜純化用得不多，一般使用一些易揮發(fā)的氨水等。酸堿鹽會(huì)雖對(duì)FLASH C18色譜柱壽命有影響，但對(duì)于一些特殊樣品（如多酸堿性質(zhì)樣品）有很好的分離效果。關(guān)于酸堿鹽在色譜分離中作用原理，后續(xù)有機(jī)會(huì)將給大家開個(gè)單章進(jìn)行介紹。

使用結(jié)束后：

在FLASH C18色譜柱使用完成后，需使用純有機(jī)溶劑（乙腈或者甲醇）對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，保證沒(méi)有樣品殘留。如分離中使用鹽成分，需先用高水相流動(dòng)相再使用純有機(jī)溶劑沖洗。

若FLASH C18色譜柱處于長(zhǎng)期閑置狀態(tài)時(shí)，要將其*沖洗，建議沖洗10CV以上，最后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液中（如90%甲醇水，或者100%乙腈），且需要定期沖洗，防止柱床干涸，密封保存。

編者語(yǔ)：由于是干法裝填，一旦FLASH色譜柱柱床內(nèi)部的溶劑干涸，勢(shì)必會(huì)造成柱床塌陷。

當(dāng)C18被樣品污染，柱壓升高等情況的沖洗流程：

水→乙腈→異丙醇或其他強(qiáng)溶解性溶劑→乙腈       

編者語(yǔ)：適用于情況，如柱壓居高不下，柱床顏色沖不下。沖洗原則：1、根據(jù)樣品選擇強(qiáng)溶劑，對(duì)殘留樣品有強(qiáng)洗脫作用的流動(dòng)相；2、沖洗標(biāo)準(zhǔn)是柱壓恢復(fù)，柱床顏色恢復(fù)正常。

關(guān)于SepaFlash^TM Bonded Series C18反相柱系列產(chǎn)品

三泰科技（常州）有限公司SepaFlash^TM Bond Series C18反相柱系列產(chǎn)品具有多種規(guī)格（參見(jiàn)下表）。

超純無(wú)定形C18硅膠，粒徑40-63µm，孔徑60Å

比表面積500m²/g，碳含量17%

※ 兼容市場(chǎng)上所有快速液相制備色譜系統(tǒng)。

超純球形C18硅膠，粒徑20-45µm，孔徑100Å

比表面積320m²/g，碳含量17%

l ※ 兼容市場(chǎng)上所有快速液相制備色譜系統(tǒng)。