硅膠因其優(yōu)良的機(jī)械強(qiáng)度和表面易改性等特征,已成為應(yīng)用廣泛的色譜柱填料。高純硅膠色譜柱具有柱效高、選擇性好及分析速度快等特點(diǎn),因而被廣泛用于分離極性小分子如藥物,而用于糖、肽或蛋白質(zhì)分離較少。
高純硅膠色譜柱的直徑為數(shù)毫米,其中填充有固體吸附劑或液體溶劑,所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相,與固定相相對應(yīng)的還有一個(gè)流動(dòng)相。流動(dòng)相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體,一般為氮或氦氣。待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動(dòng)相,流動(dòng)相帶著樣品進(jìn)入色譜柱,故流動(dòng)相又稱為載氣。載氣在分析過程中是連續(xù)地以一定流速流過色譜柱的,而樣品則只是一次一次地注入,每注入一次得到一次分析結(jié)果。
柱效是高純硅膠色譜柱對色譜中兩種物質(zhì)分離能力的大小,高效液相色譜法(HPLC)柱效測定的高低,不僅反映出填料性能,有時(shí)也反映出裝填技術(shù)的好壞。所以,測定柱效無論對生產(chǎn)填料或預(yù)裝柱的生產(chǎn)者,還是對使用填料或預(yù)裝柱的色譜工作者來說,都是很重要的。通過柱效的測定,生產(chǎn)者可以比較準(zhǔn)確地進(jìn)行質(zhì)量控制,色譜工作者可根據(jù)測定的柱效選擇合適的色譜柱和監(jiān)督色譜柱使用過程中是否被污染。
不同的色譜柱,固然有不同的柱效;但同一根色譜柱,測定柱效使用的方法不同,例如所用的化合物、流動(dòng)相、流動(dòng)相流速、溫度、進(jìn)樣量、進(jìn)樣體積、半峰寬的測量等等不同,所得到的理論塔板數(shù)也不相同。當(dāng)然,可以對所測定的柱效附上有關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件,但是,若將柱效的測定方法趨于一致,測定條件大致相同,生產(chǎn)者和色譜工作者會(huì)更加方便。
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