隨著醫(yī)療器械與電子技術(shù)的深度結(jié)合,使得熒光定量PCR在各個領(lǐng)域,包括人類身份鑒定、病原體檢測、產(chǎn)前診斷、藥物療效考核、腫瘤基因檢驗(yàn)都有廣泛應(yīng)用。各大醫(yī)院、科研機(jī)構(gòu)、實(shí)驗(yàn)室等場所都隨處可見,但是,他們選購熒光定量PCR時可能會遇到這樣的問題:到底選購幾通道的合適呢?
先先帶大家了解一下什么是所謂的通道呢?
顧名思義,通道(channel)指的是針對每一種熒光的檢測器,比如你在一個管中做多個顏色,針對多個靶基因。每個顏色需要一個檢測器來檢測熒光信號的強(qiáng)弱,每一個針對不同顏色的檢測器,就是一個通道。
目前市面上大部分熒光定量PCR儀在設(shè)計時已經(jīng)固定了熒光通道數(shù),因此大家在選擇儀器時會比較慎重,通道數(shù)選少了擔(dān)心無法滿足后續(xù)新的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用;通道數(shù)選多了一是擔(dān)心購置預(yù)算不足,二是擔(dān)心某些通道可能一直閑置,用不上,造成資源浪費(fèi)。
正因?yàn)槊總€光學(xué)卡夾都是一套獨(dú)立的光路,因此您可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的當(dāng)前的購置預(yù)算以及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用需求選擇單、雙、三、四、五或六個熒光通道。如果未來有新的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,也只需要添加相應(yīng)的卡夾即可實(shí)現(xiàn)升級,實(shí)驗(yàn)室人員自己就可以進(jìn)行安裝。
除了在通道選擇上的靈活性,帶有卡夾式光路設(shè)計的熒光定量分析儀的好處還在于:每個卡夾都針對特定的波段進(jìn)行了優(yōu)化,因此針對特定的染料的檢測效果。
此外,每個卡夾有8個光源和檢測器,對應(yīng)96孔板的一列,檢測時以一列即8孔為單位進(jìn)行,相較于單孔檢測的方式,速度會更快??▕A排列于卡夾盒中,檢測時所有卡夾在卡夾盒中移動完成對96孔板的信號收集,完成96孔板6個通道的一次信號采集時間小于3秒,因此也可以大大縮短多重PCR的時間。
目前市面上生產(chǎn)熒光定量PCR 的廠家非常多,如何選擇合適的熒光定量儀器也變得非常重要。面對性能不同的產(chǎn)品,選購商品時也變得眼花繚亂起來。這時,就有人一不下心走進(jìn)了“選購誤區(qū)”。
在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX(一種熒光染料)或的Referencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個檢測通道。
這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開放的,有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要,不能單單只聽宣傳。
考慮多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。
熒光定量pcr儀的使用也應(yīng)征求實(shí)驗(yàn)科研人員的建議,畢竟真正使用器械做實(shí)驗(yàn)的還是他們。
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