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            這些超濾離心管的使用問(wèn)題你都遇到過(guò)嗎？
            
							
            
								來(lái)源：濟(jì)南來(lái)寶醫(yī)療器械有限公司  
								2021年08月16日 16:13  
                                
    
    
    
        
							
            
						
            
						
            
							
            近做實(shí)驗(yàn)不順利，經(jīng)常得不到目標(biāo)蛋白，要么就是蛋白損失很大。怎么辦呢？
            由于超濾管使用不恰當(dāng)或是超濾知識(shí)缺乏引起的問(wèn)題，簡(jiǎn)直成了實(shí)驗(yàn)汪們蛋白實(shí)驗(yàn)不成功、效率低下的常見原因之一。比如說(shuō)：
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            為什么我截留分子量選擇沒(méi)錯(cuò)，蛋白有時(shí)候卻會(huì)漏出在濾出液中？
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            為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有干擾？
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            用超濾管來(lái)分離兩種蛋白可以嗎？
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            有時(shí)候我用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能的原因是？
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            超濾管可以用來(lái)脫鹽和濃縮核酸嗎？
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            如何給超濾管滅菌？
             
            于是，膜過(guò)濾和超濾專家專門寫了一篇攻略，幫助實(shí)驗(yàn)小白們成功在通往技術(shù)大牛的道路上打怪升級(jí)。
            廢話不多說(shuō)，上干貨，小板凳搬好了哦！
            我們先來(lái)看看重點(diǎn)問(wèn)題怎么解決
            Q
            為什么我截留分子量選擇沒(méi)錯(cuò)，
            蛋白有時(shí)候卻會(huì)漏出在濾出液中？
            A
            導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測(cè)不到蛋白的原因很復(fù)雜，應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝，因?yàn)橥环N膜、截留分子量和裝置組合對(duì)于不同的蛋白質(zhì)類別甚至物種而言可能并非優(yōu)之選。
            在選擇過(guò)程中，應(yīng)先執(zhí)行以下步驟：
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            考慮樣品和分子特性：比如改變pH 可能增加構(gòu)象改變的風(fēng)險(xiǎn)，而降低溫度可能降低濃縮效率等。
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            選擇正確的膜：超濾沒(méi)有太多的膜選項(xiàng)，但您應(yīng)對(duì)再生纖維素（RC）、Hydrosart® 和聚醚砜（PES）材料進(jìn)行測(cè)試，以確定哪種材料可為您的特定材料提供較低的非特異性結(jié)合和優(yōu)的回收率。
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            選擇合適的截留分子量，通常是靶標(biāo)1/3大小的截留分子量比較適合。但有時(shí)則需要更小的孔徑來(lái)滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品，可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
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            選擇合適的裝置：賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質(zhì)、病毒、過(guò)濾應(yīng)用等廣泛的裝置選項(xiàng)；選擇合適的裝置可以有效改善結(jié)果。
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            使用合適的裝置處理方法：例如預(yù)沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結(jié)合位點(diǎn)并減少損失。
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            考慮樣品控制方法，例如使用裝置內(nèi)的“死體積”移走所有截留物，或預(yù)灌裝濾液管以控制截留物的終體積。
             
            Q
            為什么我用濃縮后的蛋白
            做下游分析的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有干擾？
            A
            超過(guò)濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或去離子水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用 0.1 N NaOH 清洗，然后用緩沖液或去離子水再次清洗后甩干。如果必須用NaOH處理的時(shí)候，推薦試用聚醚砜（PES）膜，因?yàn)楸龋ㄔ偕w維素）RC膜更耐NaOH，同時(shí)提醒NaOH不能過(guò)夜浸泡。
            Q
            用超濾管來(lái)分離兩種蛋白可以嗎？
            A
            因?yàn)槌瑸V膜的孔徑不是規(guī)則的結(jié)構(gòu)，所以不能進(jìn)行精確的分離，所以按照經(jīng)驗(yàn)，我們推薦兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）以上才可以進(jìn)行分離。另外，賽多利斯的300k，1000k和0.2um的超濾管可以實(shí)現(xiàn)10倍以上分子量差異的蛋白粗分離。
             
            
						
            
					
            
										
										
            
						
						  
            
							
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