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人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的傳代步驟是怎樣的？
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231是一種人乳腺癌細(xì)胞系，常用于腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲性的研究。該細(xì)胞系來(lái)源于一個(gè)四級(jí)侵襲性乳腺癌患者的異種移植物，在體內(nèi)形成了高度轉(zhuǎn)移和惡性侵襲的表現(xiàn)。
通常在無(wú)菌環(huán)境中使用層流罩。培養(yǎng)基的更換與細(xì)胞的生長(zhǎng)速度密切相關(guān)。如果在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，可以去除殘留的亞甲基楓樹(shù)和死細(xì)胞?？捎糜谶M(jìn)一步科學(xué)研究，不能用于治療等方面。
血清的類型和質(zhì)量會(huì)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。血清是細(xì)胞培養(yǎng)非常重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。錯(cuò)誤使用血清會(huì)使細(xì)胞無(wú)法存活。細(xì)胞無(wú)法存活的另一個(gè)原因是培養(yǎng)基。每個(gè)細(xì)胞系都有其特定的用途和適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基。如果突然使用不同培養(yǎng)條件的培養(yǎng)基，大多數(shù)細(xì)胞不能立即適應(yīng)。
1、用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2、待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:6；
3、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為最佳消化時(shí)間，記錄最佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
MDA-MB-231細(xì)胞具有以下特征：
高度轉(zhuǎn)移能力：該細(xì)胞系可以從原位腫瘤進(jìn)入血液或淋巴管道，并在機(jī)體其他部位進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；
低黏附性：這類腫瘤細(xì)胞容易在無(wú)血清培養(yǎng)條件下暴發(fā)式擴(kuò)張，并不容易貼壁死亡；
快速增殖：MDA-MB-231生長(zhǎng)快、分裂率高，呈纖錐型或多角形；
藥物耐受性強(qiáng)：經(jīng)過(guò)多次化學(xué)治療后，部分患者可能出現(xiàn)藥物耐受情況。
缺少ERα雌激素受體表達(dá)，即是TNBC(三陰)（Triple-negative breast cancer）之一。
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