在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關(guān)注哪些細(xì)節(jié)？

來源：北京索萊寶科技有限公司 2021年08月24日 14:37

熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染，標(biāo)記上熒光。實驗完成以后，凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析，無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng)，背景低?？蓪λ械鞍走M(jìn)行染色，不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中，游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致，跑膠結(jié)束時移至凝膠末端，背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Western blot的SDS-PAGE。

熒光蛋白上樣緩沖液在進(jìn)行蛋白樣品變性處理的同時對蛋白進(jìn)行預(yù)染色，電泳結(jié)束后即可直接使用凝膠成像儀的紫外光源或者LED燈觀察電泳結(jié)果。免去了染色法染色脫色的過程，不增加任何其它操作步驟，不使用任何有機(jī)溶劑，保護(hù)環(huán)境,實驗室再無藍(lán)色污漬，電泳結(jié)束即可觀察實驗結(jié)果，節(jié)省了實驗時間。

熒光蛋白上樣緩沖液在使用時應(yīng)注意以下幾點：

1. 請勿使用該上樣緩沖液處理預(yù)染的或預(yù)處理的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。這些產(chǎn)品與不兼容。
2. 靈敏度影響因素：高pH（大于7）不會影響染色，低pH則會降低染色的效率，如果樣品的pH低于5，建議將pH調(diào)整7以上。
3. 不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用：切割蛋白條帶用以測序、質(zhì)譜分析或抗體制備。

4. 建議-20℃避光保存，如果室溫放置2-3周，則可添加新的DTT，蛋白條帶會重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP，效果也很好。

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