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            單細胞分離的特點應(yīng)用以及小技巧

            來源:上海遠慕生物科技有限公司   2021年09月06日 11:19  


              單細胞分離采用類似噴墨打印機以及一次性分配分離槽,溫和高效地接種單細胞,使用明場高分辨率成像或可選熒光分選細胞,每個單細胞分離捕獲 5張圖像,單克隆性,提高工作效率,保持并增強細胞活率,且防止交叉污染。

              采集單細胞分離的證據(jù),在接種細胞時記錄5張連續(xù)圖像,以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據(jù),提高克隆形成率,與傳統(tǒng)方法相比,在克隆形成率上可實現(xiàn)高達8倍的提升。

              保持細胞健康和無菌,正如克隆生長實驗所見,通過溫和的分離維持細胞活性,并使用無菌的一次性單向分離槽防止交叉污染,簡便、快速、可選擇以及無損分離單細胞,簡化遺傳和克隆培養(yǎng)、分析中分離過程??焖俑咝Ы臃N單個活細胞至微孔板分離系統(tǒng)的主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細胞。該系統(tǒng)通過微流控技術(shù)柔和地形成細胞液滴,同時利用白光和熒光成像實時分析細胞數(shù)量和熒光強度,將符合要求的單細胞液滴準(zhǔn)確接種至96孔板。

              主要特點
              1.分離效率>85%,單細胞活率>75%;
              2.記錄分離前后的連續(xù)5張圖像,用于支持細胞株的單克隆性;
              3.采用一次性分離槽,省卻系統(tǒng)的清洗驗證,減小交叉污染的風(fēng)險;
              4.采用白光成像和熒光成像,可根據(jù)細胞直徑、圓度以及熒光強度篩選出感興趣的細胞;
              5.內(nèi)置除靜電裝置,消除微孔板靜電,確保細胞液滴接種至微孔正中間,尤其是PCR板。

              單細胞分離系統(tǒng)可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有限稀釋法,高效地將單個活細胞接種至微孔板中。得益于分離系統(tǒng)的高效率和高活率,可以將每塊微孔板中可獲得的單克隆細胞團提高至多8塊,從而在相同的工作量下可篩選更多的細胞克隆,從中發(fā)現(xiàn)更多更優(yōu)質(zhì)的細胞株。分離過程中記錄的連續(xù)5張圖像,可以與后續(xù)的孔板成像的圖像證據(jù)互相補充,從而提高單克隆性的可信度。

              應(yīng)用范圍:連接不同管徑大小的毛細玻璃針,可分離捕獲各種非貼壁狀態(tài)的單細胞和微粒等,如細菌、酵母、藻類細胞、植物花粉、原生動物單細胞、懸浮細胞、血液細胞、免疫細胞、卵細胞、各種懸液中單細胞及特殊標(biāo)記的單細胞等。

              單細胞分離的小技巧
              1. 縮短制備單細胞懸液的時間,以保留細胞活力
              2. 考慮使用細胞篩來過濾出細胞團塊或雙細胞
              3. 注意緩沖液的選擇,包括分選和收集溶液
              4. 如果您打算在分選后培養(yǎng)細胞,請使用對數(shù)生長期的細胞,并確定最佳培養(yǎng)條件
              5. 在分選轉(zhuǎn)染后的細胞時,通常在轉(zhuǎn)染后72小時進行,以提高細胞群的生存能力
              6. 如果采用熒光抗體來分離稀有細胞,請在染色前離心抗體,以便去除任何可能被誤認(rèn)為是靶細胞的熒光顆粒
              7. 對于單細胞基因組學(xué)應(yīng)用,在分選后別忘了離心平板,以確保細胞在孔的底部
              8. 選擇一種可靠的分析技術(shù)來評估分選細胞的數(shù)量和質(zhì)量

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