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使用前經(jīng)過清潔消毒，LB培養(yǎng)基清潔與否對工作影響較大，可影響培養(yǎng)基的酸鹼度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會(huì)抑制細(xì)菌的生長。新購的培養(yǎng)基應(yīng)先用熱水沖洗，再置于 1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，使游離鹼性物質(zhì)除去(或用砂皂洗刷)，再用蒸餾水沖洗二次，若要培養(yǎng)細(xì)菌再用高壓蒸氣滅.菌(一般在15磅高壓蒸氣)，即120 ℃的溫度下30分鐘滅菌，置室溫中于燥，或用干熱滅菌，就是將培養(yǎng)基置于烘箱內(nèi)，溫度控制在120 ℃左右的情況下維持2小時(shí)，即可殺死細(xì)菌的胞芽。經(jīng)過消毒的培養(yǎng)基才能接種培養(yǎng)使用。
LB培養(yǎng)基通常使用固體培養(yǎng)基制成平板培養(yǎng)(就是平板皿名稱的由來)，平板培養(yǎng)基制作是將已裝好的滅菌瓊脂培養(yǎng)基，用溫水(無菌)熔化，取下試管的棉花塞，管口于酒精燈火焰上通過，然后微啟滅菌的培養(yǎng)基蓋，使試管口能深入為宜，傾入培養(yǎng)基后即可蓋密，再輕輕的搖勻傾入的培養(yǎng)基，使之均勻的、分布于皿底上疑結(jié)，即得平板培養(yǎng)基。由于細(xì)菌的繁殖、發(fā)育生長是與所供給的培養(yǎng)基(營養(yǎng))有直接關(guān)系，尤其是作定量檢驗(yàn)分祈，對提供營養(yǎng)物的多少，有決定意義，細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)對營養(yǎng)物提供的多少，是否均勻，這對于培養(yǎng)基、皿底是否平整極為重要。如培養(yǎng)基皿底不平，瓊脂的培養(yǎng)基分布的厚薄隨坩喬皿皿底是否平整而有厚有薄，薄的部分營養(yǎng)供給就不足，這對定量分析有著密切關(guān)系，故對定量培養(yǎng)基皿底要求特別平整的原因所在。但作一般定性培養(yǎng)基(檢驗(yàn)細(xì)菌、菌落生長、繁殖等)，使用普通培養(yǎng)基即可。
細(xì)菌的分離培養(yǎng)，一般標(biāo)本中常同時(shí)混有數(shù)種細(xì)菌，如口腔咽喉菌及耳朵的分泌物、痰液、小便、大便等，凡需研究的細(xì)菌，須先用分離培養(yǎng)法，使其成為純培養(yǎng)，通過對一細(xì)菌作純培養(yǎng)，用肉汁加2%瓊脂的固體培養(yǎng)基，經(jīng)保溫漏斗以脫脂棉花過濾，注入試管中，二天后檢驗(yàn)新菌，再投入培養(yǎng)基內(nèi)，先制成平板，在無菌的條件下進(jìn)行接種，接種后把培養(yǎng)基倒置移入25一一30 ℃的恒溫箱內(nèi)(倒置是避免水蒸氣凝成液滴滴人皿底內(nèi)，影晌菌落的生長)，通過培養(yǎng)進(jìn)一步觀察細(xì)菌的形態(tài)和色澤，研究致病的病菌，以及對它防治的效果。
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