什么是內(nèi)毒素?
細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的復合物,當細菌裂解時便會大量釋放出來。內(nèi)毒素單位為EU。
內(nèi)毒素對試驗的影響
內(nèi)毒素存在極大程度地影響轉(zhuǎn)染效率。同時內(nèi)毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應(yīng),造成實驗中的假陽性。因此,為了保證高轉(zhuǎn)染率和轉(zhuǎn)染細胞高存活率,必須從質(zhì)粒制備的過程中將內(nèi)毒素去除。
內(nèi)毒素和質(zhì)粒的關(guān)系
由于內(nèi)毒素兩親性和負電荷性,性質(zhì)類似于DNA,因此在質(zhì)粒純化中會伴隨質(zhì)粒一同被純化出來。質(zhì)粒中內(nèi)毒素含量的高低常用EU/?g質(zhì)粒表示。
按照EU/?g大小,質(zhì)粒被分為三個級別:測序級別(>50EU/?g)、轉(zhuǎn)染級別(<50EU/?g)和無內(nèi)毒素級別(<0.1EU/?g)。
再次強調(diào)
當你提取的質(zhì)粒DNA是為了轉(zhuǎn)染原代細胞、懸浮細胞或者敏感細胞;進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作;進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗,就應(yīng)該考慮Endotoxin-Free的質(zhì)粒。
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