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中性蛋白酶是最早用于工業(yè)生產(chǎn)的蛋白酶。大多數(shù)微生物中性蛋白酶是金屬酶，酶蛋白中含有Zn2。相對分子質(zhì)量35 000～40 000等電點(pI)8～9，是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶，很易自溶，即使在低溫冰凍干燥，也會造成相對分子質(zhì)量的明顯減少。
代表性的中性蛋白酶是耐熱解蛋白芽孢桿菌所產(chǎn)生的熱解素與枯草芽孢桿菌(B.subtilis)的中性蛋白酶。這些酶在pH6～7穩(wěn)定，超出此范嗣迅速失活。以酪蛋白為底物時，枯草芽孢桿菌蛋白酶最適pH為7～8，熱解素是pH7～9，曲霉菌的酶是pH6.5～7.5。
一般中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性較差?？莶菅挎邨U菌中性蛋白酶在pH7、60℃處理15min，失活90%;棲土曲霉(Aspergillus terricola)3.942中性蛋白酶55℃處理10min。失活80%以上;
而放線菌166中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性更差，只在35。C以下穩(wěn)定，45℃迅速失活。只有少數(shù)例外，如熱解素在80。C處理1h，尚存酶活50%;
有的枯草芽孢桿菌中性蛋白酶，在pH7、65℃酶活幾乎無損失。酶的最適溫度取決于反應(yīng)時間.在反應(yīng)時間lO～30min內(nèi)，最適溫度45～50℃。鈣離子可以增加酶的穩(wěn)定性，并減少酶自溶，故中性蛋白酶提純過程的每一步都需有鈣離子的存在。
用合成底物實驗表明，中性蛋白酶只水解由亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等疏水大分子氨基酸提供氨基的肽鍵。對不同氨基酸構(gòu)成的肽鍵的水解能力，因酶的來源而異，大體是亮氨酸>苯丙氨酸>酪氨酸。
工業(yè)生產(chǎn)中性蛋白酶常用的碳源是葡萄糖、淀粉、玉米粉、米糠、麩皮等，主要的氮源是豆餅粉、魚粉、血粉、酵母、玉米漿等。在固體培養(yǎng)棲土曲霉3.942時，麩皮原料中摻加30%～40%廢曲或酒糟，酶活可達15 000U/g以上。
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