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            細(xì)胞不貼壁、生長緩慢甚至死亡分析與解決!

            來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2021年10月14日 10:45  

            在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,這些問題從細(xì)胞生長角度來說,針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好,甚至死亡的原因,我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。

            一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
            可能原因:
            胰蛋白酶消化過度;
            支原體污染;
            培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解);
            細(xì)胞老化;
            接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

            解決方法:
            縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度;
            分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;
            使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2;
            啟用新的保種細(xì)胞;
            調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

            二、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢
            可能原因:
            由于更換不同培養(yǎng)液或血清;
            培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞;
            培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;
            試劑保存不當(dāng);
            接種細(xì)胞起始濃度太低;
            細(xì)胞已老化;
            支原體污染 。

            解決方法:
            比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗,讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;
            換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補加谷氨酰胺及生長因子;
            用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;
            血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;
            增加接種細(xì)胞起始濃度;
            換用新的保種細(xì)胞;
            分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

            三、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
            可能原因:
            細(xì)胞本身的狀態(tài)
            細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;
            細(xì)胞的接種量:接種量過低,細(xì)胞生長緩慢;
            細(xì)胞傳代時間過晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長;
            胰酶消化時間過長或過短:時間過長,細(xì)胞死亡;時間過短,細(xì)胞未*分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;
            細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速融。

            污染
            支原體污染;
            霉菌污染。
            培養(yǎng)基或血清
            更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證;
            選擇的培養(yǎng)基是否合適;
            培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

            培養(yǎng)環(huán)境
            CO2供應(yīng)是否正常;
            培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

            解決方法:
            根據(jù)以上四個方面的可能原因,做出針對性的解決方案
            注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù)、接種量等;
            避免產(chǎn)生污染(用正規(guī)、合法、可溯源的血清);
            要用合適的血清或培養(yǎng)基,最好經(jīng)過驗證;
            注意實驗室的環(huán)境。

            四、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
            可能原因:
            培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2;
            培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大;
            細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷;
            培養(yǎng)液滲透壓不正確;
            培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

            解決方法:
            檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;
            檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;
            取新的保存細(xì)胞種;
            檢測培養(yǎng)液滲透壓;
            換入新鮮培養(yǎng)液。

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