我10個物質里，怎么調梯度，總有兩個峰分不開：我增加保留了，7、8兩個峰分不開，我降低保留了，4、5兩個峰分不開，怎么破啊？??

我們依照藥典的方法，結果不理想，在不換柱子的前提下，怎么優(yōu)化梯度條件？??

是不是梯度洗脫方法的優(yōu)化，像等度洗脫一樣，主要考慮保留和選擇性呢？??

1.  梯度陡度（T）對梯度洗脫的影響

T越大，k越小，在N、ɑ不變的情況下，R越小

圖(a)、(b)、(c)、(d)分別是5min、10min、20min、40min之內組分B比例由10%升高到60%的結果，T越小，分離度越好。

2.強洗脫溶劑組分(B)濃度變化范圍的影響：

注意：

a.  樣品流出的譜峰不要太靠近色譜圖的開始處，最好第一個譜峰的保留時間為死時間t_M的2倍，無浪費的保留時間（如B濃度值較低，則譜圖起始較空曠，如B濃度值過高，則圖譜后部較空曠）

b.  在梯度洗脫結束前，所有峰都從色譜柱洗脫出來

(a)(b)(c)圖初始比例分別為甲醇-水（50：50）、甲醇-水（60：40）、甲醇-水（80：20），初始比例甲醇的比例越低，第一個峰出峰越晚。

3.柱溫、流速變化對保留值的影響

梯度洗脫中，柱溫、流速相對分離效果的影響會相對較小

4.梯度洗脫的滯后現(xiàn)象對保留值的影響

由于實際儀器的條件不同，會出現(xiàn)梯度洗脫向后平移一段時間，此時間即為滯后時間，此時間會導致組分峰的保留時間變化，從而改變各組分峰的相對位置。

先走一個線性梯度程序，在20min內，有機相從5%-10%到90%—100%，讓所有的峰全部走出來，并優(yōu)化梯度，分別比較了10min,15min,20min之內有機相從5%升至100%，結果如下：

從圖上看到，15min之內有機相比例從5%升至100%梯度下，分離度更理想。

優(yōu)化梯度（小范圍地提高某兩個峰的分離度）

• 上圖中，峰3、峰4的分離度達不到要求，因為滯留時間的存在可能會使得峰展寬，所以通過優(yōu)化滯留體積，峰形、分離度都有了明顯改善：

• 以上優(yōu)化后，各峰分離度有了明顯改善，但峰7、峰8分離度還沒有達到基線分離，通過減小這段時間的梯度陡度嘗試提高峰7、峰8的分離度，優(yōu)化條件以及對應的譜圖如下：

圖譜對比情況：

再次優(yōu)化（設置合理的柱平衡時間）

連續(xù)進樣，發(fā)現(xiàn)重現(xiàn)性不好， 梯度程序中增加了平衡時間后，重現(xiàn)性有了明顯改善：