生物化學(xué)分析的準(zhǔn)確性,除取決于分析方法的選擇是否合適以及全部分析工作是否嚴(yán)格按照要求進(jìn)行外,在很大程度上還取決于樣品的采取是否有最佳的代表性。如果不遵循科學(xué)方法采樣,樣品缺乏代表性,即使分析工作嚴(yán)謹(jǐn)無誤,也得不到正確的結(jié)論。因此,必須對樣品的采取、處理和保存給予足夠的重視。
從大田或?qū)嶒?yàn)田采回的樣品,一般數(shù)量較大,稱為“原始樣品”。再按原始樣品的種類(如根、莖、葉、花、果實(shí)等)分別選出“平均樣品”。再根據(jù)分析任務(wù)的要求和樣品的特征,從平均樣品中選出供分析用的“分析樣品”。由此可見,分析樣品的獲得須經(jīng)一系列復(fù)雜而仔細(xì)的步驟,在實(shí)際工作中一定要以高度認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度對待。
(一)原始樣品及平均樣品的采取、處理與保存
原始樣品及平均樣品的采取,按分析目的可有兩種方法:一種是為了鑒定品質(zhì)而進(jìn)行的混合取樣;另一種是按植物生育期取樣。
1.混合取樣法:一般種子樣品可用混合取樣法。把代表一定面積的收獲物先經(jīng)脫粒,然后在木板或牛皮紙上鋪成均勻的一層,再按對角線把樣品分成4 個(gè)三角形,取兩個(gè)相對的三角形的樣品,而將另外兩個(gè)三角形的樣品淘汰。如此操作,一直淘汰至所要求的數(shù)量為止。這個(gè)取樣法叫做“四分法”,這樣取得的平均樣品在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)適當(dāng)處理即可制成分析樣品。
豆類及油料種子選取平均樣品的方法與谷類種子取樣法相同。注意,樣品中不要有未成熟的種子或混雜物,不要將簸出去的種子加到平均樣品中。
如果直接從田里采取植株樣品,在生長均一的情況下,可按對角線或沿平行的直線等距離采樣。如果植株長勢不均勻,則應(yīng)根據(jù)生長的強(qiáng)弱,按比例采取大約5 個(gè)點(diǎn)的樣品后混合。每個(gè)樣點(diǎn)取的植株數(shù)隨植物的種類和采樣的時(shí)間有所不同。如小麥等密植型作物或其它作物幼苗,可按面積采取或采取樣品束(一束樣品的植株數(shù)視需要而定),象玉米、甘蔗等作物,每個(gè)樣點(diǎn)采取一株就夠了。
選取甘薯、馬鈴薯、甜菜、蘿卜等塊根、塊莖的平均樣品時(shí),必須注意到大、中、小三類樣品的比例。然后縱切取其一部分(二分之一至四分之一)組織作為平均樣品,否則就不具有代表性。
一般蔬菜樣品也按對角線法采取。番茄樣品應(yīng)選擇簇位相同、成熟程度一致的果實(shí),取果實(shí)的1/4 組成平均樣品。
采取蘋果、梨、桃、柑橘等水果的平均樣品時(shí),一般選1~3 株果樹為代表,從植株的全部收獲物中選取大、中、小果實(shí)以及向陽、背陽部分的果實(shí)混合成平均樣品。葡萄等漿果,采樣時(shí)可在不同地點(diǎn)的5~10 株植物上的各個(gè)部位包括向陽、背陽以及上、下各部位采樣。
2.按生育期取樣法:在幼苗期取樣,因植株較小,采取的株數(shù)就比較多,盡管各種作物有所不同,總的原則是所取樣品的干重應(yīng)當(dāng)是分析用的2 倍。
植株逐漸長大,每次采取的株數(shù)也相應(yīng)減少,但絕不能采單株作樣品。在各個(gè)生育期取樣時(shí),都應(yīng)作觀察記錄。
取樣地點(diǎn)一般在邊行區(qū),取樣點(diǎn)的四周不應(yīng)有缺株現(xiàn)象。
取樣后,按分析目的分成各個(gè)部分,如根、莖、葉、穗等,然后捆好,附上標(biāo)簽,分別裝入樣品袋。
瓜果、蔬菜取回后因水分較多,容易霉?fàn)€,可在冰箱中冷藏,或用于干燥滅菌,或用酒精處理或烘干,以供分析之用。
(二)分析樣品的處理與保存
采回的新鮮植株樣品如果混有泥土,不應(yīng)用水沖洗,可用濕布擦凈,然后置空氣流通處風(fēng)干或烘干。烘干樣品時(shí),可把植株放入80℃烘箱中,以停止酶活動(dòng)并驅(qū)除水分。烘干樣品時(shí),注意溫度不能過高,以免把植株烤焦。最好不要曬,以免灰塵沾染或被風(fēng)刮走。
全植株樣品應(yīng)按照根、莖、葉、種子等分開。果實(shí)必須剖出時(shí),要用鋒利的不銹鋼刀子,不允許將其中汁液流失。
為了避免糖、蛋白質(zhì)、維生素等成分的損失,可采用真空干燥或冷凍真空干燥法。風(fēng)干或烘干的樣品,根據(jù)其特點(diǎn)分別進(jìn)行以下處理:
1.種子樣品的處理:一般谷物種子的平均樣品可用電動(dòng)樣品粉碎機(jī)粉碎。事先要把機(jī)器內(nèi)收拾干凈,最初粉碎出的少量樣品可棄去不用,然后正式粉碎,使全部樣品通過一定篩孔的篩子,混合均勻,按四分法取出一定數(shù)量的樣品細(xì)粉作為分析樣品,貯存于干燥的磨口廣口瓶中,同時(shí)貼上標(biāo)簽,注明樣品的名稱、編號(hào)、采取地點(diǎn)、處理、采樣日期和采樣人姓名等。長期保存時(shí),標(biāo)簽應(yīng)涂石蠟,并在樣品中加適當(dāng)?shù)姆栏瘎?br/>
蓖麻、芝麻等油料種子應(yīng)取少量樣品在研缽內(nèi)研碎,以免脂類損失。
2.莖稈樣品的處理:干燥后的莖稈樣品也要磨碎。粉碎莖稈的粉碎機(jī)不同于種子粉碎機(jī),其切割部分由幾付排列方向相反的刀片組成。粉碎后的樣品按上法保存。
3.多汁樣品的處理:一般多汁樣品,如瓜果蔬菜等,其化學(xué)成分(糖、蛋白質(zhì)、維生素等)在保存中易發(fā)生變化,往往多用新鮮樣品進(jìn)行各項(xiàng)測定。將它們的平均樣品切成小塊,放入電動(dòng)組織搗碎機(jī)中打成勻漿,如果樣品含水量較少,可按樣品重量加入適量水,然后搗碎。樣品量少時(shí)可用手持勻漿器或在研缽內(nèi)研磨,必要時(shí)可在研缽內(nèi)加少量石英砂。
如果所測物質(zhì)不穩(wěn)定(如某些維生素和酶等),則上述操作均應(yīng)在低溫下進(jìn)行。樣品勻漿如來不及測定,可暫存冰箱內(nèi),或滅菌后密封保存。
4.丙酮干粉的制備:在分離、提純或測定某種酶的活力時(shí),丙酮干粉法是常用的有效方法之一。
該種方法是將新鮮材料打成勻漿,放入布氏漏斗,按勻漿重量緩慢加入10倍的低溫冰箱內(nèi)冷卻到-15℃~-20℃的丙酮,迅速抽氣過濾,再用5 倍冷丙酮洗3 次,在室溫下放置1 小時(shí)左右至無丙酮?dú)馕?,然后移到盛有五氧化二磷的真空干燥器?nèi)干燥。丙酮干粉的制備在低溫下完成,所提丙酮干粉可長期保存于低溫冰箱。用這種方法能有效地抽提出細(xì)胞中的物質(zhì),還能除掉脂類物質(zhì),免除脂類干擾,而且使得某些原先難溶的酶變得溶解于水。
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