Seahorse XF 細胞線粒體壓力測試

 Seahorse XF 細胞線粒體壓力測試全面了解線粒體功能

1、實驗背景

 安捷倫 SeahorseXF 細胞線粒體壓力測試通過在 Seahorse XFe 和 XF 細胞外流量分析儀上直接測量細胞的氧消耗速率（OCR）來表征線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。它是基于培養(yǎng)板的活細胞實驗，能夠?qū)崟r監(jiān)測 OCR。   

   實驗使用 XF 傳感器探針板內(nèi)置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調(diào)節(jié)劑加入細胞孔中，從而得到反映線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。實驗試劑盒里的調(diào)節(jié)劑為寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，F(xiàn)CCP），魚藤酮（Rotenone）。

Seahorse XF 細胞線粒體壓力測試詞匯表：

• 基礎(chǔ)呼吸（Basal respiration）：用來滿足細胞ATP需求和線粒體質(zhì)子滲漏的氧消耗。表示細胞在基礎(chǔ)條件下的能量需求。

• ATP產(chǎn)生（ATP Production）：加入ATP合酶抑制劑寡霉素后減少的氧氣消耗速率，代表基礎(chǔ)呼吸中被用來驅(qū)動ATP產(chǎn)生的部分。表示用來滿足細胞能量需求的線粒體ATP產(chǎn)生。

• H+（質(zhì)子）滲漏（H+ (Proton) leak）：與 ATP產(chǎn)生不偶聯(lián)的基礎(chǔ)呼吸的剩余部分。質(zhì)子滲漏可以被看作是線粒體損傷的標志，也可被看作是一種調(diào)節(jié)線粒體ATP產(chǎn)生的機制。

• 最大呼吸（Maximal respiration）：加入解偶聯(lián)劑FCCP之后獲得的最大氧氣消耗速率。FCCP通過刺激呼吸鏈以最大能力運轉(zhuǎn)模擬生理的“能量需求”，導(dǎo)致底物（糖，脂肪和氨基酸）的快速氧化以應(yīng)對這一代謝挑戰(zhàn)。顯示細胞能夠達到的最大呼吸速率。

• 備用呼吸能力（Spare respiratory      capacity）：這個測量指標表示細胞應(yīng)對能量需求的能力以及細胞呼吸與其理論最大值的差距。細胞應(yīng)對能量需求的能力可作為細胞適應(yīng)性或靈活性的一個指標。

• 非線粒體呼吸（Nonmitochondrial      respiration）：加入魚藤酮后，由于一部分細胞中的酶繼續(xù)消耗氧而存留的氧消耗。這對于線粒體呼吸的準確測量很重要。

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