MTT溶液（5mg/ml）

產(chǎn)品貨號：T10182

產(chǎn)品規(guī)格：5ml/10ml

產(chǎn)品簡介：

MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT檢測原理在于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色 Formazan并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在特定溶劑 (如DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 細胞培養(yǎng)液

2. 胰蛋白酶消化液

3. 低速離心機

4. 96孔培養(yǎng)板

5. 細胞計數(shù)板或計數(shù)器

6. DMSO或Formazan solvent

7. 搖床

8. 顯微鏡

9. 酶聯(lián)免疫檢測儀

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。

2. 低速離心，收集細胞沉淀。

3. 用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。

4. 細胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000 /孔。通常細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入6000個細胞即可。具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。

5. 37℃ 5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6～24h。

6. 按照實驗具體要求，給予0～20μl干預藥物處理，37℃ 5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。

7. 棄培養(yǎng)液，每孔加入10μl MTT solution和100μl新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。

8. 棄培養(yǎng)液，每孔加入110μl DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結晶物充分溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大或較多，溶解的時間會長一些。

9. 在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定各孔吸光度。

注意事項：

1. MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復凍融的次數(shù)，以免失效，當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。

2. 由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應注意蒸發(fā)問題。

3. MTT solution在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或20～25℃水浴至全部融解后使用。

4. 觀察formazan是否*溶解，亦可以借助光學顯微鏡觀察。

5. 培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。

6. 應注意設立OD調(diào)零孔和對照。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。